Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

This short animation demonstrates enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to measure specific antibodies. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(Portuguese/Português translation by Samantha Abreu, Translator. Reviewed by Ana Julia Perrotti-Garcia, FFLCH USP SP, Freelance Translator & Interpreter.)
O ensaio imunoadsorvente ligado a enzima (ELISA) é um método geralmente útil para testes sorológicos.

O objetivo desta animação é explicar como este teste funciona.

As sorologias no ELISA são feitas em placas com orifícios de microtitulação, para facilitar

o preparo e teste das diluições de soro.

Para entender melhor como este ensaio é feito, vamos olhar de perto

o que acontece em um dos orifícios desta placa de ensaio.

Para realizar o ensaio, os orifícios são revestidos com o antígeno de interesse.

Para os testes comerciais, esta etapa é feita pelo fabricante do ensaio.

Para o início dos testes, os orifícios são preenchidos com diferentes diluições do soro do paciente.

Se anticorpos contra o antígeno estiverem presentes, irão se ligar ao antígeno

fixado ao fundo dos orifícios.

Mas apenas os anticorpos específicos para o antígeno se ligarão aos orifícios.

Os orifícios são então lavados, para remover os anticorpos que não se ligaram.

Em seguida, é adicionada uma solução contendo um anticorpo animal contra os anticorpos humanos.

Este segundo anticorpo é conjugado a uma enzima por ligação covalente.

Os orifícios são lavados novamente, para remover anticorpos conjugados à enzima que não estejam ligados.

Para finalizar, adiciona-se um substrato cromogênico.

A interação entre substrato e a enzima conjugada ao segundo anticorpo

gera cor visível.

O desenvolvimento da cor nos orifícios do anticorpo específico pode ser visto a olho nu

ou pode ser quantificado com um leitor eletrônico de placa.

A reação é menos intensa se a diluição do soro for maior e a quantidade de anticorpo capturado

nos orifícios for reduzida.

O título é a maior diluição com desenvolvimento de cor visível.