Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

This short animation demonstrates enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to measure specific antibodies. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(French translation by Samuel Scherber)
Le dosage immuno-enzymatique ou 'ELISA' est un format couramment utilisé pour les tests sérologiques.

Le but de cette animation est d'expliquer comment fonctionne ce test.

Généralement, on effectue les sérologies ELISA dans des plaques de microtitration à puits multiples afin de

facilement préparer et tester les dilutions de sérum

Pour mieux comprendre comment ce test est effectué, regardons de plus près ce qui se passe dans

l'un des puits de cette plaque d'essai.

Pour effectuer le test, les puits sont recouverts avec l'antigène d'intérêt.

Dans le cas des tests commerciaux, cela se ferait par le fabricant du test.

On commence les tests en remplissant les puits avec des dilutions de sérum du patient.

Si des anticorps contre l'antigène sont présents, ils se lieront à l'antigène fixé au

fond des puits.

Seulement les anticorps reconnaissant ces antigènes se lieront dans les puits.

Les puits sont ensuite rincés pour retirer tous les anticorps non-liés.

Ensuite, une solution d'un anticorps animal qui reconnaît les anticorps humains est ajoutée.

Cet anticorps secondaire est conjugué de manière covalente à une enzyme.

Les puits sont ensuite rincés de nouveau, cette fois pour enlever tout anticorps conjugué avec enzyme (c'est-à-dire secondaire) non-lié.

Enfin, une solution d'un substrat d'enzyme chromogène est ajoutée .

L'interaction entre le substrat et l'enzyme sur l'anticorps secondaire génère un visible

couleur.

Le développement de couleur dans les puits de l'anticorps spécifique est visibile à l'oeil nu

ou peut être quantifié avec grâce au lecteur de plaque électronique.

Plus le sérum est dilué, la quantité d'anticorps capturé

dans le puits diminue, et donc, moins la réaction est intense.

Le titre est définie par la dilution la plus élevée qui a encore développé un couleur définie.