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Enzyme immunoassay (EIA) to detect antigens

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    (Spanish/Español translation by Paula Corbacho, IES Lenguas Vivas "J R Fernández", Buenos Aires, Argentina. Spanish. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan)
    Muchas pruebas sencillas de diagnóstico rápido detectan antígenos específicos en muestras biológicas
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    mediante el uso de inmunoensayos enzimáticos.
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    El propósito de esta animación es explicar cómo funciona un prototipo de estos ensayos.
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    El inmunoensayo enzimático se puede realizar en una placa de microtitulación de múltiples pocillos o en cualquier otra superficie de adherencia sólida.
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    En este ejemplo, voy a utilizar la placa de microtitulación, así que veamos más de cerca uno de los pocillos
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    en esta prueba para ver lo que sucede durante la realización del ensayo.
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    La placa se prepara para realizar un ensayo en particular recubriendo los pocillos con anticuerpos
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    que se unirán al antígeno de interés.
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    A continuación, se llenan los pocillos con la muestra clínica, que puede ser una muestra de suero,
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    secreciones respiratorias, fluido cerebroespinal, orina, u otro fluido corporal.
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    Si el antígeno está presente en la muestra, se unirá a los anticuerpos fijados.
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    En este ejemplo, lo verde representa el antígeno de interés, y las demás formas
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    representan otras moléculas de la muestra.
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    Sin embargo, cabe destacar que sólo el antígeno específico -el verde-, a diferencia de las moléculas irrelevantes,
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    se une a los pocillos recubiertos con anticuerpo.
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    Esto explica la especificidad de la prueba.
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    Luego, se lavan los pocillos para eliminar las moléculas que no se unieron, mientras el antígeno
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    de interés queda pegado a los pocillos.
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    Ahora se agrega un segundo anticuerpo, dirigido contra otro epitope del mismo antígeno.
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    Estos anticuerpos están conjugados de forma covalente a una enzima, indicada por el círculo amarillo,
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    en la porción Fc del segundo anticuerpo.
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    Se unen al antígeno que está fijado en el pocillo y esto proporciona un segundo nivel
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    de especificidad al ensayo.
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    Los pocillos se lavan de nuevo para eliminar cualquier anticuerpo suelto y, en el paso final,
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    se añade una solución del sustrato enzimático generador de color.
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    La interacción del sustrato y la enzima capturada genera color visible
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    en la solución.
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    A nivel macroscópico, el desarrollo de color revela las muestras que tienen
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    al segundo anticuerpo unido al antígeno en los pocillos
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    Así, los pocillos que cambian de color son los que contienen el antígeno de interés,
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    es decir, los resultados positivos.
Title:
Enzyme immunoassay (EIA) to detect antigens
Description:

This short animation demonstrates detection of specific antigens using the enzyme immunoassay. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.
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Video Language:
English
Duration:
02:06

Spanish subtitles

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