(Spanish/Español translation by Paula Corbacho, IES Lenguas Vivas "J R Fernández", Buenos Aires, Argentina. Spanish. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan) Muchas pruebas sencillas de diagnóstico rápido detectan antígenos específicos en muestras biológicas
mediante el uso de inmunoensayos enzimáticos.
El propósito de esta animación es explicar cómo funciona un prototipo de estos ensayos.
El inmunoensayo enzimático se puede realizar en una placa de microtitulación de múltiples pocillos o en cualquier otra superficie de adherencia sólida.
En este ejemplo, voy a utilizar la placa de microtitulación, así que veamos más de cerca uno de los pocillos
en esta prueba para ver lo que sucede durante la realización del ensayo.
La placa se prepara para realizar un ensayo en particular recubriendo los pocillos con anticuerpos
que se unirán al antígeno de interés.
A continuación, se llenan los pocillos con la muestra clínica, que puede ser una muestra de suero,
secreciones respiratorias, fluido cerebroespinal, orina, u otro fluido corporal.
Si el antígeno está presente en la muestra, se unirá a los anticuerpos fijados.
En este ejemplo, lo verde representa el antígeno de interés, y las demás formas
representan otras moléculas de la muestra.
Sin embargo, cabe destacar que sólo el antígeno específico -el verde-, a diferencia de las moléculas irrelevantes,
se une a los pocillos recubiertos con anticuerpo.
Esto explica la especificidad de la prueba.
Luego, se lavan los pocillos para eliminar las moléculas que no se unieron, mientras el antígeno
de interés queda pegado a los pocillos.
Ahora se agrega un segundo anticuerpo, dirigido contra otro epitope del mismo antígeno.
Estos anticuerpos están conjugados de forma covalente a una enzima, indicada por el círculo amarillo,
en la porción Fc del segundo anticuerpo.
Se unen al antígeno que está fijado en el pocillo y esto proporciona un segundo nivel
de especificidad al ensayo.
Los pocillos se lavan de nuevo para eliminar cualquier anticuerpo suelto y, en el paso final,
se añade una solución del sustrato enzimático generador de color.
La interacción del sustrato y la enzima capturada genera color visible
en la solución.
A nivel macroscópico, el desarrollo de color revela las muestras que tienen
al segundo anticuerpo unido al antígeno en los pocillos
Así, los pocillos que cambian de color son los que contienen el antígeno de interés,
es decir, los resultados positivos.