Staining of a Gram-Negative Bacterium

This short animation demonstrates a gram stain of gram-negative bacterium. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(Portuguese/ Português translation byAna Julia Perrotti-Garcia, FFLCH USP SP, Freelance Translator & Interpreter)
Este programa irá explicar como o processo de coloração de Gram é capaz de diferenciar bactérias gram-positivas

e gram-negativas mostrando os eventos da coloração que ocorrem em nível ultra-estrutural

Trata-se de uma animação, de uma série de duas, que mostra especificamente a coloração de bactérias gram-negativas

com as principais estruturas da superfície bacteriana representadas esquematicamente.

O círculo no canto inferior direito mostra a aparência das bactérias

se forem examinadas ao microscópio durante cada etapa do processo de coloração.

Sem a coloração, as bactérias ficariam transparentes e invisíveis.

Depois da fixação da lâmina pelo calor, aplica-se primeiro cristal violeta por um minuto e, em seguida,

a lâmina é lavada.

O corante azul pigmenta a parede celular bacteriana e as bactérias adquirem a cor azul

se examinadas ao microscópio neste ponto do procedimento.

Em seguida, aplica-se solução de iodo sobre a lâmina por um minuto e, em seguida, lava-se novamente.

Durante esta etapa, o cristal violeta e o iodo combinam-se para formar um complexo maior

no interior das camadas da parede celular.

Microscopicamente, as bactérias adquirem coloração azul escuro ou preta após esta etapa.

A lâmina é agora enxaguada com um agente descorante, uma solução alcoólica com acetona.

Por causa da relativa simplicidade da parede celular gram-negativa, os complexos de cristal violeta/iodo

podem ser eliminados pelo enxágue e os microrganismos parecem transparentes novamente nesta fase

pois o corante escuro foi removido.

Por fim, a lâmina é contra-corada com vermelho neutro ou safranina por um minuto...

sendo depois lavada pela última vez.

O corante vermelho confere a cor vermelha à bactérias e esta cor domina sua aparência microscópica.

Assim, é por causa da estrutura mais simples da parede celular que as bactérias gram-negativas ...

parecem vermelhas ao microscópio após este procedimento de coloração.