Enzyme immunoassay (EIA) to detect antigens

This short animation demonstrates detection of specific antigens using the enzyme immunoassay. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(French translation by Samuel Scherber)
Beaucoup de simples tests de diagnostic rapide détectent les antigènes spécifiques dans les échantillons biologiques

en utilisant une méthode immuno-enzymatique.

Le but de cette animation est d'expliquer comment un prototype de ce test fonctionne.

Le dosage immuno-enzymatique peut être fait soit dans une plaque de microtitration à puits multiples soit sur tout autre adhésion

surface solide.

Je vais utiliser la plaque de microtitration dans cet exemple. Alors, regardons de plus près à l'un des puits

de ce test pour voir ce qui se passe lors de la réalisation du dosage.

On prépare la plaque pour effectuer un test d'abord en liant sur les puits des anticorps

qui reconnaît l'antigène d'intérêt.

Puis on remplit les puits avec l'échantillon clinique, qui peut être un échantillon de sérum,

des sécrétions respiratoires, de la liquide céphalorachidien, de l'urine, ou un autre fluide corporel.

Si l'antigène est présent dans l'échantillon, il se liera aux anticorps immobilisés.

Dans cet exemple, la forme verte représente l'antigène d'intérêt pendant que les autres formes

représentent d'autres molécules présentent dans l'échantillon.

Toutefois, notons que seulement l'antigène particulier, soit le vert, et aucune des molécules non pertinents,

se lie aux puits revêtus d'anticorps.

Cela explique la spécificité du test.

Les puits sont ensuite rincés pour enlever les antigènes non-liés, ne laissant que l'antigène

d'intérêt coincé dans les puits.

Maintenant, un second anticorps, ciblant un autre épitope sur l'antigène d'intérêt est ajouté.

Ces anticorps-ci sont conjugués de manière covalente à une enzyme symbolisé par le cercle jaune

à la partie Fc de l'anticorps secondaire.

Ils se lient à l'antigène qui est fixé dans le puits, ce qui donne un niveau supplémentaire

à la spécificité du test.

Les puits sont de nouveau rincés pour éliminer les anticorps non-liés, et dans l'étape finale, une solution

d'un substrat d'enzyme chromigénique est ajouté.

L'interaction entre le substrat et l'enzyme capturée génère une couleur visible à l'oeil nu dans

la solution.

Au niveau macroscopique, l'apparition de la couleur indique les échantillons qui ont des

anticorps sécondaires liés à l'antigène cible dans le puits.

Ainsi, les puits changeant de couleur sont ceux qui contiennent l'antigène d'intérêt,

ou, en d'autres termes, les résultats positifs.