< Return to Video

Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR)

  • 0:00 - 0:03
    researchlabs@ واحد آموزشی شرکت طب یاران سیلک یاخته
  • 0:03 - 0:06
    این ویدیو نشان می دهد که چگونه می توان با استفاده از
  • 0:06 - 0:09
    PCR یک نوکلئیک اسید خاص را در نمونه های بالینی
  • 0:09 - 0:13
    شناسایی کردو مفدار ان را سنجید
  • 0:13 - 0:23
    این موضوع با شناسایی محصول PCR تکثیر شده انجام می شود
  • 0:24 - 0:31
    این فرایند Real time PCRیا RT PCR نامیده می شود
  • 0:31 - 0:40
    برای اینکه بفهمیم محصولات PCR چگونه شناسایی می شوند،
  • 0:40 - 0:46
    در ابتدا باید اتفاقاتی که در یک سیکل PCR می افتد را بررسی کنیم.
  • 0:46 - 0:53
    اولین مرحله در PCR، افزایش دمای واکنش
  • 0:53 - 0:56
    و ذوب کردن dna دورشته ای می باشد.
  • 0:56 - 0:59
    سپس وقتی که دما پایین امد،
  • 0:59 - 1:06
    پرایمرهای اختصاصی به توالی های انتهایی dna می چسبند.
  • 1:07 - 1:13
    حالا DNA جدید می تواند با فعالیت آنزیم پلیمراز
  • 1:13 - 1:16
    در جهت های مخالف ساخته شود.
  • 1:16 - 1:21
    در نتیجه دو کپی از DNA اولیه وجود خواهد داشت.
  • 1:25 - 1:28
    اگر این فرایند را متوجه نشدید
  • 1:28 - 1:34
    ، ویدیوهای مربوط به PCRساده را یکبار دیگر مرور کنید.
  • 1:36 - 1:40
    برای شناسایی تولید محصولات جدید در RT PCR،
  • 1:40 - 1:43
    واکنش PCR نیاز به مواد دیگری نیز دارد:
  • 1:44 - 1:48
    یک پروب DNAتک رشته ای.
  • 1:48 - 1:52
    این پروب برای جفت شدن با بخشی از DNA طراحی شده است
  • 1:52 - 1:55
    که در بین دو پرایمر سنتز می شود.
  • 1:55 - 1:59
    به هرحال بر خلاف پرایمرها، این پروب با روش های اختصاصی
  • 1:59 - 2:02
    شناسایی می شود.و حساسیت شناسایی را بالا می برد
  • 2:02 - 2:09
    یکی از این نوکلئوتیدها با یک مولکول فلورسنت
  • 2:09 - 2:17
    و دیگری با مولکول QUENCHER یا خاموش کننده لیبل می شود.
  • 2:17 - 2:21
    مولکول خاموش کننده، به سرعت انرژی نورهای متساعدشده از
  • 2:21 - 2:23
    فلورسنت را جذب می کند.
  • 2:23 - 2:27
    البته تا زمانی که در فاصله نزدیکی از یکدیگر باقی بمانند.
  • 2:30 - 2:38
    حالا بیایید ببینیم وقتی این مواد در واکنش حضور دارند، چه اتفاقی می افتد.
  • 2:40 - 2:44
    پرایمرها به رشته های DNA جدا شده، می چسبد.
  • 2:44 - 2:48
    پروب هم به جایگاه مکمل بین پرایمرها متصل می شود.
  • 2:50 - 2:55
    انزیم، از دو انتهای پرایمرها، DNA جدید را می سازد.
  • 2:55 - 3:00
    هم چنین این انزیم یک فعالیت خارج هسته ای دیگر هم دارد:
  • 3:01 - 3:05
    این انزیم وقتی در مسیر خود به DNAدو رشته ای می رسد،
  • 3:05 - 3:08
    تمامی نوکلئوتیدهای DNA را جدا کرده
  • 3:08 - 3:12
    و ان ها دوباره جایگزین می کند.
  • 3:13 - 3:16
    زمانی که پلیمراز، از پروب عبور می کند،
  • 3:16 - 3:25
    نوکلئوتید دارای مارکر فلورسنت و خاموش کننده را از هم جدا می کند.
  • 3:25 - 3:31
    وقتی این دو مارکر جدا شدند، مولکول فلورسنت در صورت تحریک
  • 3:31 - 3:35
    میتواند نور قابل تشخیصی را تولید کند.
  • 3:35 - 3:38
    هر بار که رشته جدید از DNA ساخته می شود،
  • 3:38 - 3:43
    یک مولکول فلورسنت از خاموش کننده خود جدا می ماند.
  • 3:43 - 3:49
    بنابراین با دوبرابر شدن مقدار DNA در هر سیکل PCR،
  • 3:49 - 3:54
    مقدار انرژی تولیدی توسط فلورسنت نیز بالا می رود.
  • 3:54 - 4:02
    این انرژی زیاد توسط یک فلورمتر در داخل
    دستگاه ترموسایکلر اندازه گیری می شود.
  • 4:03 - 4:09
    بنابراین اگر شما فرایند را با نمونه بالینی دارای یک کپی از DNA اغاز کنید،
  • 4:09 - 4:13
    به اندازه 40 سیکل PCR زمان می برد
  • 4:13 - 4:17
    تا این انرژی از طریق فلورمتر دستگاه، شناسایی شود.
  • 4:17 - 4:24
    اگر نمونه شما دارای بیش از 32 کپی از DNA باشد،
  • 4:24 - 4:31
    فرایند شناسایی در طی 5 سیکل کمتر اتفاق می افتد.
  • 4:32 - 4:37
    و اگر 1024 برابر بیشتر از نمونه خود را داشته باشید،
  • 4:37 - 4:42
    فلورسنت در طی 10 سیکل کمتر شناسایی خواهد شد.
  • 4:43 - 4:50
    بنابراین مقدار DNA موجود در نمونه،
    با توجه به تعداد سیکل های PCR شناسایی خواهد شد.
  • 4:50 - 4:57
    زیرا مقدار فلورسنت نمونه به پایین ترین حد استانه تشخیص رسبده است
  • 4:57 - 5:06
    RT PCR معمولا برای شناسایی مقدار ویروس در خون بیماران HIV ،
  • 5:06 - 5:10
    هپاتیت B و دیگر ویروس ها به کار می رود
  • 5:10 - 5:15
    اما HIV یک ویروس دارای RNA است و DNA ندارد.
  • 5:15 - 5:19
    RNAتک رشته ای است.
  • 5:19 - 5:24
    بنابراین این فرایند چگونه انجام می شود؟
  • 5:24 - 5:28
    پاسخ این است: RNA بعد از کپی شدن
  • 5:28 - 5:34
    یا تبدیل شدن به DNA دو رشته ای اندازه گیری می شود.
  • 5:34 - 5:38
    این انیمیشن چگونگی این موضوع را نشان می دهد.
  • 5:39 - 5:44
    در ابتدا RNA ویروسی از ویروس ازاد میشود
  • 5:44 - 5:54
    سپس با استفاده از انزیم ریورس ترنس کریپتاز، از RNA ویروسی یک DNA مکمل ساخته می شود.
  • 5:55 - 5:56
    مشابه عمل ترجمه ی طبیعی که اتفاق می افتد
  • 5:58 - 6:03
    در بعضی از پروتوکل ها یک انزیم RNase اختصاصی هم اضافه می شود
  • 6:03 - 6:07
    تا RNA را بسازد و به ان اجازه می دهد تا تجزیه شود.
  • 6:09 - 6:14
    جدا از اینکه این مرحله اتفاق بیوفتد یا نه، مرحله کلیدی بعدی این است
  • 6:14 - 6:24
    که مشابه با واکنش PCR، DNAپلیمراز و پرایمر یک رشته DNA مکمل را می سازد.
  • 6:24 - 6:30
    در انتهای واکنش، RNA تک رشته ای ویروسی
  • 6:30 - 6:37
    به DNA دور شته ای تبدیل شده که همان نوکلئوتیدها را دارد.
  • 6:37 - 6:43
    حالا فرایند PCR می تواند برای این ,DNA همانند قبل انجام شود.
  • 6:43 - 6:44
    researchlabs@ مرجع دانلود ویدئو های آموزشی
Title:
Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR)
Description:
more » « less
Video Language:
English
Duration:
06:45

Persian subtitles

Revisions

Our website uses cookies for analysis purposes.