How to Prepare a Gram Stain

This show video demonstrates how to prepare a gram stain. This resource was developed by Charles Adjei Osei of the Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/. Video transcribed by Andrea Matsumoto (University of Michigan).

(French translation by Samuel Scherber)
[Musique]

Étape 1. Faire un frottis

Avant de prélever un inoculum d'une boîte de pétri, passez la pointe jaune ou cure-dent dans une flamme.

Vous devriez aussi mettre sur la lame une goutte d'enduit.

Prélevez une colonie, en touchant/frottant doucement la pointe jaune ou cure-dent stérile dans une partie la boîte de pétri.

Emulssionez la colonie avec l'enduit sur la lame pour créer

un frottis d'environ deux à trois centimètres de large.

Étape 2. Fixer la lame doucement à la chaleur (après qu'il ait été séché à l'air.)

Ainsi, après le séchage à l'air, fixer à la chaleur la lame en la passant trois ou quatre fois

dans une flamme.

Cela tue l'organisme,

vous permettant de le coller sur la lame, empêchant de plus l'autolyse et rendant l'organisme

perméable à la coloration.

Étape 3. Recouvrir le frottis avec du cristal violet

Déposer sur le frottis quelques gouttes de cristal violet pendant une minute.

Laissez-le agir 60 secondes.

Jeter l'excès de cristal violet et rincer la lame sous l'eau douce d'un robinet.

Étape 4. Inonder la lame avec la solution de Lugol

Recouvrir le frottis avec une solution de Lugol pendant une minute.

Laissez-le agir 60 secondes.

Rincer l'excès de solution de Lugol de la lame en la passant dans de l'eau du robinet douce.

L'étape 5. Décolorer brièvement le frottis avec de l'acétone.

Décolorer le frottis avec de l'acétone pendant dix secondes.

Jeter l'excès d'alcool, puis rincer la lame sous l'eau du robinet, l'eau du robinet douce.

L'étape 6. Contre-colorer avec du rouge neutre (ou du safranine).

Utilisez du rouge neutre pour contre-colorer la lame pendant une minute.

Recouvrir le frottis avec du rouge neutre.

Laissez-le agir 60 secondes.

Jeter le rouge neutre excès et laver la lame sous l'eau du robinet.

Epongez la lame jusqu'au séchage avec un papier filtre ou un papier buvard.

Ne la frottez pas.

La lame est maintenant prête pour être examinée au microscope à 100X (huile à immersion).

Mettez l'huile à immersion sur la partie de lame où se trouve le frottis.

Puis, mettre la lame sous le microscope.

Nous utilisons l'objectif cinq cents (500X zoom). Examiner la lame.