How to Prepare a Gram Stain

This show video demonstrates how to prepare a gram stain. This resource was developed by Charles Adjei Osei of the Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/. Video transcribed by Andrea Matsumoto (University of Michigan).

(Portuguese/ Português translation by Ana Julia Perrotti-Garcia, FFLCH USP SP, Freelance Translator & Interpreter)
[Música]

Passo 1. Prepare o esfregaço

Prepare o esfregaço: flambe a alça e colete o inóculo de uma cultura fresca.

Depois de colocar uma gota de selante na lâmina.

Colete parte do inóculo do centro da cultura.

Umedeça o material coletado, unindo-o ao selante, sobre a lâmina

fazendo um esfregaço de cerca de dois a três centímetros.

Passo 2. Aqueça suavemente para fixar a lâmina (depois de secar ao ar).

Após secar ao ar, aqueça para fixar o esfregaço, passando pela chama

cerca de três ou quatro vezes.

Esse procedimento mata os microorganismos.

Fixando-os à lâmina e impede sua autólise,

tornando os microorganismos permeáveis à coloração.

Passo 3. Cobrir o esfregaço com cristal violeta

Cubra o esfregaço com cristal violeta por um minuto.

Deixe o corante agir por 60 segundos.

Remova o excesso de cristal violeta e lave em água corrente, sem jatos fortes.

Passo 4. Cobrir a lâmina com solução iodada de Lugol

Cubra o esfregaço com solução de Lugol por um minuto.

Deixe o corante agir por 60 segundos.

Lavo excesso de lugol com água corrente, sem jatos fortes.

Passo 5. Descoloração rápida com acetona.

O esfregaço é descolorido com acetona por dez segundos.

Remova o excesso de álcool e lave em água corrente, sem jatos fortes.

Passo 6. Contra-coloração com vermelho neutro (ou safranina).

Use vermelho neutro como contra-corante, por um minuto.

Cubra o esfregaço com o vermelho neutro.

Deixe o corante agir por 60 segundos.

Remova o excesso de vermelho neutro em água corrente.

Aplique papel filtro ou papel absorvente, para eliminar o excesso de umidade.

Não esfregue.

A lâmina está pronta para o exame microscópico em 100X (imersão em óleo).

Coloque o óleo de imersão na lâmina corada.

Monte a lâmina no microscópio.

Estamos usando a objetiva para aumento 500X. Examine a lâmina.