Ensaios de algutinação para detectar antígenos

Esta curta animação mostra a deteccão de antígenos específicos através do ensaio de aglutinação. Este material foi desenvolvido por Cary Engleberg da Universidade de Michigan. E faz parte de um módulo de aprendizagem maior sobre métodos laboratoriais para microbiologia clínica. O módulo completo, a animação editável e o transcrito do vídeo estão disponíveis em http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. Este material está sob licença Creative Commons Atribuição-Uso-Não-Comercial. Licença 3.0http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(Translated into Brazilian Portuguese/Português by Marina S. Rodrigues) Ensaios de aglutinação têm sido usados durante décadas como um método simples para detectar substâncias antigênicas

em amostras biológicas.

Este vídeo tem como objetivo explicar como este método funciona na prática

e expor suas limitações.

O ensaio de aglutinação usa pequenas partículas, geralmente esferas de látex.

As esferas são revestidas com um anticorpo específico contra o antígeno que você

gostaria de detectar.

O teste é geralmente realizado em um cartão ou lâmina, de vidro ou plástico, frequentemente com uma superfície

preta.

Primeiro você adiciona uma suspensão das esferas revestidas em cada um dos

três círculos da lâmina.

Perceba que a suspensão é suficientemente concentrada para produzir uma aparência leitosa no fundo.

Agora você adiciona algumas gotas da amostra desconhecida que está interessado em testar.

Mas, também será necessário usar um dos círculos para uma solução de controle negativo,

que não contem antígenos, e outro círculo para o controle positivo, que contem o antígeno

de interesse.

Em seguida, a lâmina é balançada gentilmente para misturar as esferas com as soluções teste e

as amostras contendo o antígeno de interesse começarão a aglutinar as esferas.

Isto produzirá a aparência de grumos visíveis e a solução mudará de

leitosa para clara e transparente.

Esta transição deve ocorrer na área com o controle positivo.

Se o antígeno estiver presente na amostra desconhecida, haverá formação de grumos.

O círculo do controle negativo deve permanecer sem grumos e opaco.

Lembre-se que as esferas estão revestidas com anticorpos específicos de forma que cada esfera

pode se ligar a vários antígenos.

Para que a aglutinação funcione. O antígeno de interesse deve ser capaz de se ligar a múltiplas esferas.

Portanto, neste ensaio, os antígenos que podem ser detectados são limitados a grandes macromoléculas

que possuem domínios antigênicos repetitivos.

Moléculas como cápsulas microbianas, flagelos ou lipopolissacarídeos;

Uma longa molécula repetitiva de antígeno pode ligar-se a diversas esferas e formar grumos

ou aglutinar;

Por isso, pequenas quantidades de antígeno que possuem vários domínios repetitivos podem

formar grumos visíveis e serem detectadas por este teste.

Esta é a base do teste.

Por fim, aqui estão alguns exemplos de ensaios de aglutinação que são utilizados na prática clínica.