Preparing an Acid-Fast Stain using the Ziehl-Nielsen Method

This four and half minute video shows how to prepare an Acid-Fast Stain using the Ziehl-Nielsen Method. This resource was developed by Charles Adjei Osei of the Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommerical 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/. Video transcribed by Andrea Matsumoto (University of Michigan).

Prepare o esfregaço de escarro, coletando amostra do recipiente de expectoração,

usando uma alça esterilizada.

Espalhe sobre a lâmina, em uma área de cerca de 2-3 cm de diâmetro

Flambe a alça novamente.

Flambe a lâmina com o esfregaço, para fixá-lo

Veja a lamparina e os corante usados no processo de coloração.

Cubra o esfregaço com carbol fucsina.

Aqueça na chama da lamparina, de forma intermitente, sem deixar ferver

aqueça sem ressercar, intermitentemente por 5 minutos.

Afaste a chama e deixe a lâmina esfriar, antes de lavar o excesso de corante

do esfregaço.

Cubra o esfregaço com o descolorante (ácido sulfúrico a 20%) por 2 minutos.

Depois de 2 minutos, elimine o descolorante e lave a lâmina com água corrente

ou água destilada.

Cubra o esfregaço com o contra-corante azul de metileno, por 2 minutos.

Não aqueça!

Lave com água corrente ou água destilada.

Deixe a lâmina secar ao ar, em um suporte.

Coloque óleo de imersão na lâmina corada e examine em uma objetiva de 100X.

(aumento de 100 vezes).

Você verá bacilos avermelhados ou rosados, que podem ter a forma de cocos

ou podem aparecer como espirais ou como pontos.