Preparing an Acid-Fast Stain using the Ziehl-Nielsen Method

This four and half minute video shows how to prepare an Acid-Fast Stain using the Ziehl-Nielsen Method. This resource was developed by Charles Adjei Osei of the Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommerical 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/. Video transcribed by Andrea Matsumoto (University of Michigan).

(French translation by Samuel Scherber)
Préparer le frottis de crachat en prélevant de crachat du récipient de crachat avec l'aide d'une anse d'inoculation,

stérilisée.

Etaler le crachat sur une lame, d'une façon large, environ deux à trois centimètres de diamètre et

puis re-flamber l'anse d'inoculation.

Fixer le frottis de crachat à la chaleur.

Voici la lampe à alcool et les colorants nécessaires pour la coloration de Ziehl-Neelsen.

Recouvrir le frottis avec la fuchsine phéniquée (de Ziehl).

Chauffer-la à la lampe à alcool par intermittence jusqu'à ce qu'elle commence à se vaporiser, mais elle ne doit pas se bouillir et

la colorant ne devrait pas se sécher; cette chauffage par intermittence ne dépasserait les cinq minutes.

Rejeter la colorant et laisser la lame se refroidir avant de rincer l'excès de colorant

du frottis.

Recouvrir le frottis avec le décolorant, qui est une solution d'acide sulfurique dilué au 20%, pendant deux minutes.

Après deux minutes, déverser le décolorant et rincer la lame à l'eau du robinet ou à

l'eau distillée.

Recouvrir le frottis avec la contre-coloration, qui est une solution de bleu de méthylène, pendant deux minutes.

Ne la chauffez pas.

Rincer-la à l'eau du robinet ou de l'eau distillée.

Sécher-la à l'air sur l'égouttoir.

Mettez l'huile à immersion sur le frottis de crachat et ensuite l'observer au microscope

sous l'objectif de cent (100X).

Et on s'attend à voir des bacilles rosées ou rouges, qui peuvent apparaître dans une forme de cocci

ou ils peuvent aussi apparaître dans une forme de spirale ou de point.