Preparing an Acid-Fast Stain using the Ziehl-Nielsen Method

This four and half minute video shows how to prepare an Acid-Fast Stain using the Ziehl-Nielsen Method. This resource was developed by Charles Adjei Osei of the Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommerical 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/. Video transcribed by Andrea Matsumoto (University of Michigan).

(Spanish/Español translation by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan)
Preparar frotis de esputo tomando el esputo del envase mediante el asa bacteriológica,

que ha sido esterilizado.

Extender en un portaobjetos de dos a tres centímetros de diámetro y

luego flamee el asa bacteriológica otra vez.

Flamee el extendido para fijarlo

y prepare los colorantes para continuar con la tinción.

Cubra el frotis con fucsina-carbol.

Y caliéntelo con la lámpara de alcohol de forma intermitente para evitar que hierva

o se evapore y seque. Debe entonces ser intermitente durante cinco minutos.

Déjelo enfriar y descarte el exceso de colorante

del frotis.

Cubra el frotis con el decolorante que es 20% de ácido sulfúrico durante dos minutos.

Después de dos minutos descarte el decolorante y lávelo con agua del grifo o con agua destilada.

Cubrir el frotis con la tinción de contraste con azul de metileno durante dos minutos.

No lo caliente.

Lavar bajo el agua del grifo o agua destilada.

Seque al aire en la rejilla de drenaje.

Agregue aceite de inmersión sobre el portaobjetos y examínelo en el microscopio

con un objetivo 100X.

Los bacilos se ven rojizos o rosados, y pueden verse en forma de cocos

o también pueden verse como un espiral o un punto.