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(Portuguese/Português translation by Ana Julia Perrotti-Garcia, FFLCH USP SP, Freelance Translator & Interpreter)[br]Um ensaio de aglutinação é um modo simples de detectar e medir anticorpos

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em uma amostra clínica, contra um antígeno específico.

0:00:09.379,0:00:15.020
Nesta animação serão demonstrados os princípios e as armadilhas potenciais do ensaio.

0:00:15.060,0:00:21.380
O principal reagente utilizado no ensaio é uma solução de pequenas pérolas insolúveis

0:00:21.380,0:00:22.830
geralmente compostas de látex.

0:00:22.830,0:00:28.160
Alternativamente, para medir anticorpos contra um agente patogênico microbiano pode-se usar

0:00:28.160,0:00:31.100
bactérias mortas ou células de levedura como partículas aglutinantes.

0:00:31.100,0:00:36.550
Mas, neste exemplo, usamos pérolas de látex, preparadas de modo a

0:00:36.550,0:00:41.870
serem revestidas pelo antígeno pesquisado e tenham uma concentração suficiente

0:00:41.870,0:00:45.710
para produzir uma suspensão leitosa visível.

0:00:45.710,0:00:49.630
Para medir anticorpos contra o antígeno, as partículas são adicionadas aos orifícios

0:00:49.630,0:00:55.020
de uma placa de microtitulação com 96 orifícios. Adiciona-se soro de diferentes pacientes

0:00:55.020,0:00:57.300
aos orifícios da primeira coluna.

0:00:57.300,0:01:02.980
Duas diluições dos soros são preparadas nas fileiras.

0:01:02.980,0:01:09.980
Então, adiciona-se soro de controle positivo e negativo nas últimas duas colunas.

0:01:12.060,0:01:16.130
Quando a placa é incubada à temperatura ambiente,

0:01:16.130,0:01:18.609
os orifícios com controle negativo ficam inalterados.

0:01:18.609,0:01:22.929
Os orifícios com controle positivo formam um botão visível no fundo

0:01:22.929,0:01:28.840
e a solução nesses orifícios passa de leitosa para translúcida.

0:01:28.840,0:01:35.219
Então, o que explica o aparecimento de orifícios positivos

0:01:35.219,0:01:38.170
e o que explica a falta de alteração nos orifícios negativos?

0:01:38.170,0:01:42.679
Para entender o que acontece, vamos analisar a aparência microscópica

0:01:42.679,0:01:46.270
dos orifícios positivos e negativos, para ver o que acontece em cada caso.

0:01:46.270,0:01:51.049
Quando não existem anticorpos no orifícios, as pérolas permanecem em suspensão

0:01:51.049,0:01:53.169
conferindo-lhe um aspecto leitoso.

0:01:53.169,0:01:59.959
Mas, quando está presente um anticorpo específico. há união das pérolas e forma-se um reticulado.

0:01:59.959,0:02:05.569
Isto faz com que as pérolas se aglutinem e formam-se grandes agregados que precipitam

0:02:05.569,0:02:07.189
para o fundo arredondado dos orifícios.

0:02:07.189,0:02:12.560
A suspensão, que era leitosa, fica translúcida pela precipitação dos complexos,

0:02:12.560,0:02:17.750
e os agregados formam uma pastilha ou um botão no fundo do orifício.

0:02:17.750,0:02:22.320
Então, há a formação de um botão no fundo dos orifícios

0:02:22.320,0:02:25.110
com anticorpos específicos suficientes para precipitar as pérolas.

0:02:25.110,0:02:29.860
Mas quando o anticorpo está muito diluído, não há precipitação.

0:02:29.860,0:02:36.860
Os títulos de anticorpos de um paciente são a última diluição de soro capaz de produzir precipitação.

0:02:49.670,0:02:54.550
Mas, como se explica a ausência de precipitação nos orifícios mais concentrados,

0:02:54.550,0:02:59.350
com soro com títulos mais altos, mostrados pela seta laranja?

0:02:59.350,0:03:04.190
Imagine um orifício que tem muito mais moléculas de anticorpo do que pérolas.

0:03:04.190,0:03:08.290
As pérolas vão ser totalmente revestidas por anticorpos

0:03:08.290,0:03:12.320
e não haverá possibilidade de reticulação e precipitação.

0:03:12.320,0:03:18.730
Este fenômeno, chamado de pró-zona, às vezes ocorre em casos de sífilis.

0:03:18.730,0:03:23.510
O teste de triagem padrão para sífilis é um ensaio de aglutinação

0:03:23.510,0:03:28.200
Adiciona-se soro não diluído às pérolas revestidas com o antígeno cardiolipina.

0:03:28.200,0:03:33.210
Na sífilis secundária, os títulos de anticorpos às vezes são tão altos

0:03:33.210,0:03:36.300
que o teste exibe uma pró-zona e o resultado é falso negativo.

0:03:36.300,0:03:40.870
Então, como podemos superar este problema potencial

0:03:40.870,0:03:42.390
e fazer um diagnóstico laboratorial correto?

0:03:42.390,0:03:46.610
Que tal diluir o soro e depois testar novamente?

0:03:46.610,0:03:51.000
Diluindo o anticorpo, neste caso, as quantidades de anticorpos e antígenos

0:03:51.000,0:03:53.510
tornam-se praticamente equivalentes.

0:03:53.510,0:03:56.670
Assim, existem condições para reticulação.

0:03:56.670,0:04:01.510
Quando ocorre a reticulação, forma-se um precipitado e desenvolve-se um botão

0:04:01.510,0:04:03.970
no fundo do tubo, que indica um teste positivo.