1
00:00:00,269 --> 00:00:04,081
(French translation by Samuel Scherber)
Le test d'agglutination est un moyen simple pour détecter et mesurer dans un échantillon clinique

2
00:00:04,081 --> 00:00:09,379
des anticorps reconaissant un antigène d'intérêt spécifique.

3
00:00:09,379 --> 00:00:15,006
On vous montrera dans cette animation les principes et les limitations potentielles de cet essai.

4
00:00:15,006 --> 00:00:21,038
Le réactif principal utilisé dans l'essai est une solution de perles minuscules insolubles qui sont généralement composées de

5
00:00:21,038 --> 00:00:22,083
latex.

6
00:00:22,083 --> 00:00:28,016
Autrement, les cellules bactériennes ou de levure tuées peuvent être utilisées comme des particules d'agglutinations

7
00:00:28,016 --> 00:00:31,001
pour mesurer les anticorps contre un agent pathogène microbien.

8
00:00:31,001 --> 00:00:36,055
Toutefois, dans cet exemple, des billes de latex seront utilisées; elles ont été préparées de telle sorte qu'elles sont totalement recouvertes par

9
00:00:36,055 --> 00:00:41,087
l'antigène d'intérêt et sont suffisamment concentrées pour produire

10
00:00:41,087 --> 00:00:45,071
une suspension laiteuse visible.

11
00:00:45,071 --> 00:00:49,063
Afin de mesurer les anticorps reconnaissant l'antigène, les particules sont ajoutées dans les puits d'une

12
00:00:49,063 --> 00:00:55,002
plaque microtitre de 96 échantillons. Puis, des sérums prélevés de patients différents sont ajoutés

13
00:00:55,002 --> 00:00:57,003
dans les puits de la première colonne.

14
00:00:57,003 --> 00:01:02,098
On effectue avec le sérum des dilutions de deux dans les rangs de façon consécutive, puis dans les dernières colonnes,

15
00:01:02,098 --> 00:01:12,006
on ajoute de sérum négatif connu et de sérum positif, qui tous les deux servent comme groupes de témoin.

16
00:01:12,006 --> 00:01:16,013
Lorsque la plaque est laissé en incubation à température ambiante, les puits contenant

17
00:01:16,013 --> 00:01:18,609
le sérum témoin négatif demeurera inchangés.

18
00:01:18,609 --> 00:01:22,929
Par contre, les puits contenant le sérum témoin positif ont développé un bouton visible à l'oeil nu

19
00:01:22,929 --> 00:01:28,084
au fond des puits et la solution dans ces puits a changé, d'apparence laiteuse à apparence claire.

20
00:01:28,084 --> 00:01:35,219
Qu'est-ce qui explique la différence en apparence entre les puits positifs et

21
00:01:35,219 --> 00:01:38,017
les puits négatifs, qui restent inchangés?

22
00:01:38,017 --> 00:01:42,679
Pour comprendre ce qui se passe, permettons de jeter un coup d'oeil au niveau microscopique dans les puits avec réactions négatives et positives

23
00:01:42,679 --> 00:01:46,027
pour voir ce qui se passe dans chaque cas.

24
00:01:46,027 --> 00:01:51,049
Lorsqu'il n'y a pas d'anticorps dans le puits contenant les perles, ces dernières restent en suspension, donnant

25
00:01:51,049 --> 00:01:53,169
une apparence laiteuse au puit.

26
00:01:53,169 --> 00:01:59,959
Cependant, lorsqu'il y a d'anticorps spécifiques présents, ils commencent à se lier à et à réticuler avec les billes.

27
00:01:59,959 --> 00:02:05,569
Cela provoque l'agglutination des billes et la formation des agrégats importants qui se coulent au fond des

28
00:02:05,569 --> 00:02:07,189
puits à fond rond.

29
00:02:07,189 --> 00:02:12,056
Cela rend la suspension claire au lieu de laiteuse, car les agrégats se coulent,

30
00:02:12,056 --> 00:02:17,075
s'agrégant en forme de pastille ou de bouton au fond du puits.

31
00:02:17,075 --> 00:02:22,032
Ainsi, vous verrez au bas d'un puits qui en contient assez des anticorps spécifiques un bouton

32
00:02:22,032 --> 00:02:25,011
pour précipiter les perles.

33
00:02:25,011 --> 00:02:29,086
Mais lorsque la concentration d'anticorps est trop diluée, le bouton n'apparaît plus.

34
00:02:29,086 --> 00:02:49,067
Le titre d'anticorps de patient est définie par la dernière dilution de sérum qui produit un bouton.

35
00:02:49,067 --> 00:02:54,055
Mais comment expliquer l'absence d'un bouton dans les puits les plus concentrés du sérum,

36
00:02:54,055 --> 00:02:59,035
avec le titre le plus élevé, comme montré par la flèche orange?

37
00:02:59,035 --> 00:03:04,019
Imaginez un puits qui contient beaucoup plus de molécules d'anticorps dedans que des perles.

38
00:03:04,019 --> 00:03:08,029
Dans ce cas, les billes seront complètement recouvertes d'anticorps et il n'y aura pas

39
00:03:08,029 --> 00:03:12,032
de possibilité de réticulation ou des précipitations.

40
00:03:12,032 --> 00:03:18,073
Ce phénomène, qui s'appelle 'prozone,' se produit parfois dans les patients atteints de la syphilis.

41
00:03:18,073 --> 00:03:23,051
Le test de dépistage standard pour la syphilis est un test d'agglutination dans laquelle

42
00:03:23,051 --> 00:03:28,002
du sérum pur est ajouté aux billes recouvertes avec l'antigène cardiolipine.

43
00:03:28,002 --> 00:03:33,021
Au cas de la syphilis secondaire, les titres d'anticorps sont parfois si élevées que le test présente

44
00:03:33,021 --> 00:03:36,003
un prozone et est donc faussement contrôlé négatif.

45
00:03:36,003 --> 00:03:40,087
Alors, comment surmonter ce problème potentiel et faire le

46
00:03:40,087 --> 00:03:42,039
diagnostic laboratoire correct?

47
00:03:42,039 --> 00:03:46,061
Aviez-vous pensé de diluer le sérum, puis faire un nouveau test?

48
00:03:46,061 --> 00:03:51,000
En diluant l'anticorps dans cette situation, les quantités d'anticorps et l'antigène seront

49
00:03:51,000 --> 00:03:53,051
assez équivalentes l'un à l'autre.

50
00:03:53,051 --> 00:03:56,067
Les conditions de réticulation sont alors atteintes.

51
00:03:56,067 --> 00:04:01,051
Maintenant, lorsque la réticulation se produit, un précipité se forme et un bouton se développe au fond

52
00:04:01,051 --> 00:04:03,970
d'un puits, indiquant un contrôle positif.