0:00:00.269,0:00:04.081
(French translation by Samuel Scherber)[br]Le test d'agglutination est un moyen simple pour détecter et mesurer dans un échantillon clinique

0:00:04.081,0:00:09.379
des anticorps reconaissant un antigène d'intérêt spécifique.

0:00:09.379,0:00:15.006
On vous montrera dans cette animation les principes et les limitations potentielles de cet essai.

0:00:15.006,0:00:21.038
Le réactif principal utilisé dans l'essai est une solution de perles minuscules insolubles qui sont généralement composées de

0:00:21.038,0:00:22.083
latex.

0:00:22.083,0:00:28.016
Autrement, les cellules bactériennes ou de levure tuées peuvent être utilisées comme des particules d'agglutinations

0:00:28.016,0:00:31.001
pour mesurer les anticorps contre un agent pathogène microbien.

0:00:31.001,0:00:36.055
Toutefois, dans cet exemple, des billes de latex seront utilisées; elles ont été préparées de telle sorte qu'elles sont totalement recouvertes par

0:00:36.055,0:00:41.087
l'antigène d'intérêt et sont suffisamment concentrées pour produire

0:00:41.087,0:00:45.071
une suspension laiteuse visible.

0:00:45.071,0:00:49.063
Afin de mesurer les anticorps reconnaissant l'antigène, les particules sont ajoutées dans les puits d'une

0:00:49.063,0:00:55.002
plaque microtitre de 96 échantillons. Puis, des sérums prélevés de patients différents sont ajoutés

0:00:55.002,0:00:57.003
dans les puits de la première colonne.

0:00:57.003,0:01:02.098
On effectue avec le sérum des dilutions de deux dans les rangs de façon consécutive, puis dans les dernières colonnes,

0:01:02.098,0:01:12.006
on ajoute de sérum négatif connu et de sérum positif, qui tous les deux servent comme groupes de témoin.

0:01:12.006,0:01:16.013
Lorsque la plaque est laissé en incubation à température ambiante, les puits contenant

0:01:16.013,0:01:18.609
le sérum témoin négatif demeurera inchangés.

0:01:18.609,0:01:22.929
Par contre, les puits contenant le sérum témoin positif ont développé un bouton visible à l'oeil nu

0:01:22.929,0:01:28.084
au fond des puits et la solution dans ces puits a changé, d'apparence laiteuse à apparence claire.

0:01:28.084,0:01:35.219
Qu'est-ce qui explique la différence en apparence entre les puits positifs et

0:01:35.219,0:01:38.017
les puits négatifs, qui restent inchangés?

0:01:38.017,0:01:42.679
Pour comprendre ce qui se passe, permettons de jeter un coup d'oeil au niveau microscopique dans les puits avec réactions négatives et positives

0:01:42.679,0:01:46.027
pour voir ce qui se passe dans chaque cas.

0:01:46.027,0:01:51.049
Lorsqu'il n'y a pas d'anticorps dans le puits contenant les perles, ces dernières restent en suspension, donnant

0:01:51.049,0:01:53.169
une apparence laiteuse au puit.

0:01:53.169,0:01:59.959
Cependant, lorsqu'il y a d'anticorps spécifiques présents, ils commencent à se lier à et à réticuler avec les billes.

0:01:59.959,0:02:05.569
Cela provoque l'agglutination des billes et la formation des agrégats importants qui se coulent au fond des

0:02:05.569,0:02:07.189
puits à fond rond.

0:02:07.189,0:02:12.056
Cela rend la suspension claire au lieu de laiteuse, car les agrégats se coulent,

0:02:12.056,0:02:17.075
s'agrégant en forme de pastille ou de bouton au fond du puits.

0:02:17.075,0:02:22.032
Ainsi, vous verrez au bas d'un puits qui en contient assez des anticorps spécifiques un bouton

0:02:22.032,0:02:25.011
pour précipiter les perles.

0:02:25.011,0:02:29.086
Mais lorsque la concentration d'anticorps est trop diluée, le bouton n'apparaît plus.

0:02:29.086,0:02:49.067
Le titre d'anticorps de patient est définie par la dernière dilution de sérum qui produit un bouton.

0:02:49.067,0:02:54.055
Mais comment expliquer l'absence d'un bouton dans les puits les plus concentrés du sérum,

0:02:54.055,0:02:59.035
avec le titre le plus élevé, comme montré par la flèche orange?

0:02:59.035,0:03:04.019
Imaginez un puits qui contient beaucoup plus de molécules d'anticorps dedans que des perles.

0:03:04.019,0:03:08.029
Dans ce cas, les billes seront complètement recouvertes d'anticorps et il n'y aura pas

0:03:08.029,0:03:12.032
de possibilité de réticulation ou des précipitations.

0:03:12.032,0:03:18.073
Ce phénomène, qui s'appelle 'prozone,' se produit parfois dans les patients atteints de la syphilis.

0:03:18.073,0:03:23.051
Le test de dépistage standard pour la syphilis est un test d'agglutination dans laquelle

0:03:23.051,0:03:28.002
du sérum pur est ajouté aux billes recouvertes avec l'antigène cardiolipine.

0:03:28.002,0:03:33.021
Au cas de la syphilis secondaire, les titres d'anticorps sont parfois si élevées que le test présente

0:03:33.021,0:03:36.003
un prozone et est donc faussement contrôlé négatif.

0:03:36.003,0:03:40.087
Alors, comment surmonter ce problème potentiel et faire le

0:03:40.087,0:03:42.039
diagnostic laboratoire correct?

0:03:42.039,0:03:46.061
Aviez-vous pensé de diluer le sérum, puis faire un nouveau test?

0:03:46.061,0:03:51.000
En diluant l'anticorps dans cette situation, les quantités d'anticorps et l'antigène seront

0:03:51.000,0:03:53.051
assez équivalentes l'un à l'autre.

0:03:53.051,0:03:56.067
Les conditions de réticulation sont alors atteintes.

0:03:56.067,0:04:01.051
Maintenant, lorsque la réticulation se produit, un précipité se forme et un bouton se développe au fond

0:04:01.051,0:04:03.970
d'un puits, indiquant un contrôle positif.