1 00:00:00,269 --> 00:00:04,081 (Spanish/Español translation by Juliana Salomón, BA, Argentina. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan.) Un ensayo de aglutinación es una manera simple de detectar y medir a los anticuerpos en un especímen... 2 00:00:04,081 --> 00:00:09,379 clínico dirigido contra un antígeno específico de interés. 3 00:00:09,379 --> 00:00:15,006 En esta animación se demostrarán los principios y las dificultades potenciales del ensayo. 4 00:00:15,006 --> 00:00:21,038 El reactivo principal usado en el ensayo es una solución de perlas diminutas insolubles, por lo general compuestas de 5 00:00:21,038 --> 00:00:22,083 látex. 6 00:00:22,083 --> 00:00:28,016 Una alternativa para medir los anticuerpos contra un patógeno microbiano es el uso de las... 7 00:00:28,016 --> 00:00:31,001 células bacterianas eliminadas o células de levadura como partícula aglutinante. 8 00:00:31,001 --> 00:00:36,055 Sin embargo, en este ejemplo se utilizan perlas de látex que se han preparado de manera que el antígeno... 9 00:00:36,055 --> 00:00:41,087 de interés cubra sus superficies y que se concentren lo suficiente como para producir una suspensión... 10 00:00:41,087 --> 00:00:45,071 visiblemente lechosa. 11 00:00:45,071 --> 00:00:49,063 Para medir los anticuerpos contra el antígeno, las partículas se añaden a los pocillos de una... 12 00:00:49,063 --> 00:00:55,002 placa de microtitulación de 96 pocillos y luego se añade suero de diferentes pacientes... 13 00:00:55,002 --> 00:00:57,003 a los pocillos de la primera columna. 14 00:00:57,003 --> 00:01:02,098 En las filas se preparan diluciones al medio de los sueros y luego se añaden, en las dos últimas columnas, 15 00:01:02,098 --> 00:01:12,006 un suero de control positivo y uno de control negativo. 16 00:01:12,006 --> 00:01:16,013 Si se deja incubar la placa a temperatura ambiente, los pocillos que contienen el suero de control negativo... 17 00:01:16,013 --> 00:01:18,609 permanecen sin cambios. 18 00:01:18,609 --> 00:01:22,929 Los pocillos que contienen el suero de control positivo desarrollan un botón visible en el... 19 00:01:22,929 --> 00:01:28,084 fondo de los pocillos, en los que la solución cambia de un aspecto lechoso a uno claro. 20 00:01:28,084 --> 00:01:35,219 Entonces, ¿cómo se explica la apariencia de los depósitos positivos? ¿cómo se explica la ausencia... 21 00:01:35,219 --> 00:01:38,017 de cambios en los depósitos negativos? 22 00:01:38,017 --> 00:01:42,679 Para entender lo que está pasando, veamos cómo se ven al microscopio los pocillos... 23 00:01:42,679 --> 00:01:46,027 con el control negativo y positivo para ver lo que ocurre. 24 00:01:46,027 --> 00:01:51,049 Cuando no hay ningún anticuerpo en el pocillo, las perlas permanecen en suspensión, dando... 25 00:01:51,049 --> 00:01:53,169 al pocillo un aspecto lechoso. 26 00:01:53,169 --> 00:01:59,959 Sin embargo, cuando los anticuerpos específicos están presentes, se unen y se entrecruzan con las perlas. 27 00:01:59,959 --> 00:02:05,569 Esto hace que las perlas se aglutinen y formen grandes agregados que se hunden hasta el fondo de... 28 00:02:05,569 --> 00:02:07,189 los pocillos de fondo redondo. 29 00:02:07,189 --> 00:02:12,056 Hacen que la suspensión se vea clara en lugar de lechosa porque los agregados se depositan... 30 00:02:12,056 --> 00:02:17,075 en el fondo del pocillo formando un botón. 31 00:02:17,075 --> 00:02:22,032 Así, podrán ver el botón en el fondo de los pocillos que tengan suficientes anticuerpos específicos... 32 00:02:22,032 --> 00:02:25,011 como para precipitar las perlas. 33 00:02:25,011 --> 00:02:29,086 Pero cuando el anticuerpo se diluye, el botón ya no aparece. 34 00:02:29,086 --> 00:02:49,067 El título de anticuerpos del paciente es la última disolución del suero que produce un botón. 35 00:02:49,067 --> 00:02:54,055 Pero, ¿cómo se explica la ausencia de un botón en los pocillos más concentrados de suero... 36 00:02:54,055 --> 00:02:59,035 con el título más elevado mostrado por la flecha naranja? 37 00:02:59,035 --> 00:03:04,019 Imagínese un pocillo que tiene muchas más moléculas de anticuerpos que perlas. 38 00:03:04,019 --> 00:03:08,029 En esta situación, las perlas estarán completamente recubiertas con anticuerpo y no habrá... 39 00:03:08,029 --> 00:03:12,032 posibilidad de entrecruce y precipitación. 40 00:03:12,032 --> 00:03:18,073 Este fenómeno, conocido como prozona, a veces se produce en casos de sífilis. 41 00:03:18,073 --> 00:03:23,051 La prueba de detección estándar para sífilis es un ensayo de aglutinación en el que se añade... 42 00:03:23,051 --> 00:03:28,002 suero sin diluir a perlas recubiertas con el antígeno cardiolipina. 43 00:03:28,002 --> 00:03:33,021 En la sífilis secundaria, los títulos de anticuerpos pueden ser tan altos que el ensayo exhibe... 44 00:03:33,021 --> 00:03:36,003 una prozona y resulta falso negativo 45 00:03:36,003 --> 00:03:40,087 Entonces, ¿cómo cree que podría superar este problema potencial y hacer un diagnóstico de laboratorio... 46 00:03:40,087 --> 00:03:42,039 correcto? 47 00:03:42,039 --> 00:03:46,061 ¿Ha pensado en diluir el suero y luego volver a hacer la prueba? 48 00:03:46,061 --> 00:03:51,000 Al diluir el anticuerpo en esta situación, las cantidades de anticuerpos y antígenos están más cerca... 49 00:03:51,000 --> 00:03:53,051 de ser equivalentes la una a la otra. 50 00:03:53,051 --> 00:03:56,067 Entonces, pueden darse las condiciones para un entrecruzamiento. 51 00:03:56,067 --> 00:04:01,051 Ahora, cuando se produce el entrecruzamiento se forma el precipitado y el botón se observa en el fondo... 52 00:04:01,051 --> 00:04:03,970 del tubo lo que indica un resultado positivo.