(Spanish/Español translation by Juliana Salomón, BA, Argentina. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan.) Un ensayo de aglutinación es una manera simple de detectar y medir a los anticuerpos en un especímen...
clínico dirigido contra un antígeno específico de interés.
En esta animación se demostrarán los principios y las dificultades potenciales del ensayo.
El reactivo principal usado en el ensayo es una solución de perlas diminutas insolubles, por lo general compuestas de
látex.
Una alternativa para medir los anticuerpos contra un patógeno microbiano es el uso de las...
células bacterianas eliminadas o células de levadura como partícula aglutinante.
Sin embargo, en este ejemplo se utilizan perlas de látex que se han preparado de manera que el antígeno...
de interés cubra sus superficies y que se concentren lo suficiente como para producir una suspensión...
visiblemente lechosa.
Para medir los anticuerpos contra el antígeno, las partículas se añaden a los pocillos de una...
placa de microtitulación de 96 pocillos y luego se añade suero de diferentes pacientes...
a los pocillos de la primera columna.
En las filas se preparan diluciones al medio de los sueros y luego se añaden, en las dos últimas columnas,
un suero de control positivo y uno de control negativo.
Si se deja incubar la placa a temperatura ambiente, los pocillos que contienen el suero de control negativo...
permanecen sin cambios.
Los pocillos que contienen el suero de control positivo desarrollan un botón visible en el...
fondo de los pocillos, en los que la solución cambia de un aspecto lechoso a uno claro.
Entonces, ¿cómo se explica la apariencia de los depósitos positivos? ¿cómo se explica la ausencia...
de cambios en los depósitos negativos?
Para entender lo que está pasando, veamos cómo se ven al microscopio los pocillos...
con el control negativo y positivo para ver lo que ocurre.
Cuando no hay ningún anticuerpo en el pocillo, las perlas permanecen en suspensión, dando...
al pocillo un aspecto lechoso.
Sin embargo, cuando los anticuerpos específicos están presentes, se unen y se entrecruzan con las perlas.
Esto hace que las perlas se aglutinen y formen grandes agregados que se hunden hasta el fondo de...
los pocillos de fondo redondo.
Hacen que la suspensión se vea clara en lugar de lechosa porque los agregados se depositan...
en el fondo del pocillo formando un botón.
Así, podrán ver el botón en el fondo de los pocillos que tengan suficientes anticuerpos específicos...
como para precipitar las perlas.
Pero cuando el anticuerpo se diluye, el botón ya no aparece.
El título de anticuerpos del paciente es la última disolución del suero que produce un botón.
Pero, ¿cómo se explica la ausencia de un botón en los pocillos más concentrados de suero...
con el título más elevado mostrado por la flecha naranja?
Imagínese un pocillo que tiene muchas más moléculas de anticuerpos que perlas.
En esta situación, las perlas estarán completamente recubiertas con anticuerpo y no habrá...
posibilidad de entrecruce y precipitación.
Este fenómeno, conocido como prozona, a veces se produce en casos de sífilis.
La prueba de detección estándar para sífilis es un ensayo de aglutinación en el que se añade...
suero sin diluir a perlas recubiertas con el antígeno cardiolipina.
En la sífilis secundaria, los títulos de anticuerpos pueden ser tan altos que el ensayo exhibe...
una prozona y resulta falso negativo
Entonces, ¿cómo cree que podría superar este problema potencial y hacer un diagnóstico de laboratorio...
correcto?
¿Ha pensado en diluir el suero y luego volver a hacer la prueba?
Al diluir el anticuerpo en esta situación, las cantidades de anticuerpos y antígenos están más cerca...
de ser equivalentes la una a la otra.
Entonces, pueden darse las condiciones para un entrecruzamiento.
Ahora, cuando se produce el entrecruzamiento se forma el precipitado y el botón se observa en el fondo...
del tubo lo que indica un resultado positivo.