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Dialogue: 0,0:00:02.10,0:00:10.06,Default,,0000,0000,0000,,(French translation by Samuel Scherber)\NLa réaction en chaîne par polymérase ou 'PCR' permet de cibler et amplifier n'importe acide nucléique spécifique des
Dialogue: 0,0:00:10.06,0:00:13.00,Default,,0000,0000,0000,,échantillons biologiques complexes.
Dialogue: 0,0:00:13.00,0:00:18.05,Default,,0000,0000,0000,,La procédure peut être utilisée pour le diagnostic afin de déterminer s'il y a
Dialogue: 0,0:00:18.05,0:00:23.05,Default,,0000,0000,0000,,une séquence nucléaire spécifique à un certain pathogène dans un échantillon clinique.
Dialogue: 0,0:00:23.05,0:00:31.00,Default,,0000,0000,0000,,Les chercheurs peut également utiliser la PCR pour amplifier et colorer de grandes quantités
Dialogue: 0,0:00:31.00,0:00:34.05,Default,,0000,0000,0000,,d'un gène particulier pour la recherche.
Dialogue: 0,0:00:34.05,0:00:39.09,Default,,0000,0000,0000,,Afin d'effectuer la PCR, il faut auparavant connaître la séquence de l'acide nucléique que vous souhaitez amplifier.
Dialogue: 0,0:00:39.09,0:00:45.07,Default,,0000,0000,0000,,Ensuite, vous définissez les limites de la séquence cible en identifiant des courtes séquences situées à
Dialogue: 0,0:00:45.07,0:00:48.02,Default,,0000,0000,0000,,chaque extrémité sur des brins opposés.
Dialogue: 0,0:00:48.02,0:00:54.58,Default,,0000,0000,0000,,Ici, les limites de la séquence cible sont indiqués par la coloration violette et verte.
Dialogue: 0,0:00:54.58,0:01:00.01,Default,,0000,0000,0000,,Si on parcourt ces séquences dans le sens de cinq prime vers trois prime, qui est dans le même sens
Dialogue: 0,0:01:00.01,0:01:06.06,Default,,0000,0000,0000,,de la synthèse de l'ADN naturel, l'élongation marquée par la violette s'allonge le long d'un brin et l'élongation marquée par le vert
Dialogue: 0,0:01:06.06,0:01:09.04,Default,,0000,0000,0000,,s'allonge le long du brin complémentaire.
Dialogue: 0,0:01:09.04,0:01:15.73,Default,,0000,0000,0000,,Puisqu'il est difficile de montrer comment fonctionne la PCR en utilisant cette représentation double hélice de l'ADN,
Dialogue: 0,0:01:15.73,0:01:22.01,Default,,0000,0000,0000,,on vous montre un diagramme de l'ADN en approximation d'une échelle, qui est plus facile à comprendre.
Dialogue: 0,0:01:22.01,0:01:27.55,Default,,0000,0000,0000,,En plus de l'échantillon clinique, la réaction de PCR nécessite trois autres ingrédients.
Dialogue: 0,0:01:27.55,0:01:33.89,Default,,0000,0000,0000,,Tout d'abord, il faut y avoir un apport massif de chacun des quatre nucléotides.
Dialogue: 0,0:01:33.89,0:01:40.89,Default,,0000,0000,0000,,Deuxièmement, l'utilisateur doit ajouter une grande quantité de petites amorces synthétiques choisies
Dialogue: 0,0:01:40.89,0:01:47.01,Default,,0000,0000,0000,,pour s'hybrider à la séquence située à chaque extrémité de l'ADN cible.
Dialogue: 0,0:01:47.01,0:01:53.44,Default,,0000,0000,0000,,Les amorces sont les ingrédients qui rendent la réaction spécifique car seulement l'ADN qui
Dialogue: 0,0:01:53.44,0:01:58.93,Default,,0000,0000,0000,,se situe entre ces deux amorces seront synthétisées dans la réaction PCR.
Dialogue: 0,0:01:58.93,0:02:04.07,Default,,0000,0000,0000,,Troisièmement, la réaction nécessite l'enzyme ADN polymérase.
Dialogue: 0,0:02:04.07,0:02:10.54,Default,,0000,0000,0000,,Pour la PCR, la polymérase est en fait d'origine d'une bactérie qui se développe normalement dans la mer à proximité
Dialogue: 0,0:02:10.54,0:02:14.35,Default,,0000,0000,0000,,des chaudes cheminées hydrothermales sur le plancher océanique.
Dialogue: 0,0:02:14.35,0:02:20.05,Default,,0000,0000,0000,,La bactérie s'appelle 'Thermus aquaticus' et donc la polymérase s'appelle 'Taq polymérase'
Dialogue: 0,0:02:20.05,0:02:21.08,Default,,0000,0000,0000,,tout simplement.
Dialogue: 0,0:02:21.08,0:02:29.02,Default,,0000,0000,0000,,Cette enzyme exotique est utilisée car il n'est pas inactivée par les hautes températures générées
Dialogue: 0,0:02:29.02,0:02:31.05,Default,,0000,0000,0000,,pendant la réaction PCR.
Dialogue: 0,0:02:31.05,0:02:38.09,Default,,0000,0000,0000,,Tous ces acteurs sont introduits dans des proportions correctes dans le même tube et sont mélangés. Puis, on place le tube dans un appareil que l'on appelle
Dialogue: 0,0:02:38.09,0:02:40.06,Default,,0000,0000,0000,,un thermocycleur.
Dialogue: 0,0:02:40.06,0:02:47.38,Default,,0000,0000,0000,,Cet instrument peut être programmé pour modifier la température du mélange à travers une série
Dialogue: 0,0:02:47.38,0:02:49.94,Default,,0000,0000,0000,,des cycles répétitifs.
Dialogue: 0,0:02:49.94,0:02:57.05,Default,,0000,0000,0000,,On peut voir, dans la partie inférieure droite de l'écran, la température de la réaction durant cette démonstration.
Dialogue: 0,0:02:57.05,0:03:04.11,Default,,0000,0000,0000,,Dans le premier cycle de PCR, la température est élevée jusqu'au point où l'ADN se dénature
Dialogue: 0,0:03:04.11,0:03:08.09,Default,,0000,0000,0000,,et les brins complémentaires se séparent.
Dialogue: 0,0:03:08.09,0:03:14.71,Default,,0000,0000,0000,,La température est ensuite abaissée à un niveau suffisant pour que les brins complémentaires puissent se réassocier.
Dialogue: 0,0:03:14.71,0:03:24.19,Default,,0000,0000,0000,,Cependant, étant donné que les amorces sont présents en très grand excès dans le mélange, ils
Dialogue: 0,0:03:24.19,0:03:28.04,Default,,0000,0000,0000,,s'hybrideront probablement aux sites complémentaires lorsque les brins se réassocier.
Dialogue: 0,0:03:28.04,0:03:37.25,Default,,0000,0000,0000,,Pendant que la température est davantage abaissée, la polymérase retrouve les extrémités libres des
Dialogue: 0,0:03:37.25,0:03:44.01,Default,,0000,0000,0000,,amorces et l'enzyme commence à ajouter des nucléotides à l'extrémité de l'amorce en utilisant le
Dialogue: 0,0:03:44.01,0:03:45.36,Default,,0000,0000,0000,,brin complémentaire comme matrice.
Dialogue: 0,0:03:45.36,0:03:52.04,Default,,0000,0000,0000,,On voit le même processus dans la réplication de l'ADN pendant la division cellulaire normale.
Dialogue: 0,0:03:52.04,0:04:00.03,Default,,0000,0000,0000,,À la fin de la première cycle de PCR, on aura deux copies de la séquence cible pour
Dialogue: 0,0:04:00.03,0:04:04.50,Default,,0000,0000,0000,,chacune qui était présente dans l'échantillon clinique original.
Dialogue: 0,0:04:04.50,0:04:12.02,Default,,0000,0000,0000,,Vous pouvez suivre les produits de l'amplification dans le panneau qui s'affiche en bas et à gauche de l'écran.
Dialogue: 0,0:04:12.02,0:04:17.07,Default,,0000,0000,0000,,Le même processus se déroule pendant le second cycle de PCR.
Dialogue: 0,0:04:17.07,0:04:25.01,Default,,0000,0000,0000,,Le theromcycleur réchauffe considérablement l'échantillon pour que les brins d'ADN complémentaires puissent se séparer,
Dialogue: 0,0:04:25.01,0:04:28.09,Default,,0000,0000,0000,,y compris ceux qui viennent d'être synthétisés.
Dialogue: 0,0:04:28.09,0:04:35.02,Default,,0000,0000,0000,,Ensuite, la température est abaissée afin de permettre les amorces à se lier à leur sites spécifiques et promouvoir
Dialogue: 0,0:04:35.02,0:04:41.00,Default,,0000,0000,0000,,la synthèse de brins complémentaires par la Taq polymérase, lorsque la température est davantage et
Dialogue: 0,0:04:41.00,0:04:47.07,Default,,0000,0000,0000,,de nouveau abaissée
Dialogue: 0,0:04:47.07,0:04:54.04,Default,,0000,0000,0000,,Au troisième tour, la même cyclisation de la température de réaction se produit avec la dénaturation des
Dialogue: 0,0:04:54.04,0:05:00.10,Default,,0000,0000,0000,,brins, l'hybridisation des amorces lorsque la température est abaissée, et la synthèse du brin nouveau lorsque
Dialogue: 0,0:05:00.10,0:05:06.09,Default,,0000,0000,0000,,les brins sont prêts pour que l'ADN polymérase puisse commencer à ajouter des nucléotides.
Dialogue: 0,0:05:06.09,0:05:14.09,Default,,0000,0000,0000,,A la fin du troisième tour il y a maintenant huit copies doubles brins de la séquence cible
Dialogue: 0,0:05:14.09,0:05:18.08,Default,,0000,0000,0000,,où il en était à l'origine une seule.
Dialogue: 0,0:05:18.08,0:05:25.10,Default,,0000,0000,0000,,En regardant le diagramme aggrandissant du coin inférieur gauche de l'écran, on peut voir ce qui se passera avec des cycles successifs
Dialogue: 0,0:05:25.10,0:05:28.00,Default,,0000,0000,0000,,de PCR.
Dialogue: 0,0:05:28.00,0:05:34.02,Default,,0000,0000,0000,,Après chaque cycle, on double le nombre de copies de la séquence cible; donc il y aura seize
Dialogue: 0,0:05:34.02,0:05:42.01,Default,,0000,0000,0000,,copies après quatre cycles, 32 copies après cinq cycles, et 64 copies d'après
Dialogue: 0,0:05:42.01,0:05:44.00,Default,,0000,0000,0000,,six cycles.
Dialogue: 0,0:05:44.00,0:05:50.06,Default,,0000,0000,0000,,Au moment où le thermocycleur a fini 40 cycles, les amorces et les nucléotides seront
Dialogue: 0,0:05:50.06,0:05:57.06,Default,,0000,0000,0000,,probablement épuisés, mais il en théorie, on aura théoriquement dix à la douzième (10 ^ 12) copies.
Dialogue: 0,0:05:57.06,0:06:03.06,Default,,0000,0000,0000,,La séquence cible aura été amplifié un trillion de fois.
Dialogue: 0,0:06:03.06,0:06:11.06,Default,,0000,0000,0000,,Ce niveau d'amplification suffit à produire une quantité de l'ADN spécifique que l'on peut en visualiser
Dialogue: 0,0:06:11.06,0:06:14.08,Default,,0000,0000,0000,,par l'électrophorèse sur gel.
Dialogue: 0,0:06:14.08,0:06:22.09,Default,,0000,0000,0000,,La tache de l'ADN en haut du gel représente tout l'ADN qui était présent
Dialogue: 0,0:06:22.09,0:06:24.07,Default,,0000,0000,0000,,dans l'échantillon clinique.
Dialogue: 0,0:06:24.07,0:06:34.04,Default,,0000,0000,0000,,Notons cependant qu'il y des nouvelle taches plus petite dans les échantillons prélevés pendant les derniers cycles de PCR.
Dialogue: 0,0:06:34.04,0:06:43.06,Default,,0000,0000,0000,,À des fins de diagnostic en laboratoire, l'ADN amplifié peut être détecté et quantifié en utilisant des
Dialogue: 0,0:06:43.06,0:06:49.01,Default,,0000,0000,0000,,méthodes plus efficaces et plus simples que l'électrophorèse sur gel.
Dialogue: 0,0:06:49.01,0:06:52.84,Default,,0000,0000,0000,,On discute une de ces méthodes dans un programme d'accompagnement.