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Format: Layer, Start, End, Style, Name, MarginL, MarginR, MarginV, Effect, Text
Dialogue: 0,0:00:02.10,0:00:10.06,Default,,0000,0000,0000,,(Spanish/Español translation by Juliana Salomón, BA, Argentina. Reviewed by Dr. Gabriela Gorelik, University of Michigan.)\NLa reacción en cadena de la polimerasa (o PCR) puede apuntar y amplificar cualquier ácido nucleico específico de...
Dialogue: 0,0:00:10.06,0:00:13.00,Default,,0000,0000,0000,,muestras biológicas complejas.
Dialogue: 0,0:00:13.00,0:00:18.05,Default,,0000,0000,0000,,El procedimiento se puede utilizar en diagnósticos para determinar si una muestra clínica contiene...
Dialogue: 0,0:00:18.05,0:00:23.05,Default,,0000,0000,0000,,una secuencia nuclear de un patógeno especíco.
Dialogue: 0,0:00:23.05,0:00:31.00,Default,,0000,0000,0000,,O también pueden usar PCR para amplificar y marcar grandes cantidades de un determinado...
Dialogue: 0,0:00:31.00,0:00:34.05,Default,,0000,0000,0000,,gen para investigación.
Dialogue: 0,0:00:34.05,0:00:39.09,Default,,0000,0000,0000,,Para realizar la PCR se debe conocer la secuencia del ácido nucleico que desea amplificar.
Dialogue: 0,0:00:39.09,0:00:45.07,Default,,0000,0000,0000,,Luego se definen los límites de la secuencia en estudio mediante la identificación de secuencias cortas en...
Dialogue: 0,0:00:45.07,0:00:48.02,Default,,0000,0000,0000,,cada extremo de las cadenas opuestas.
Dialogue: 0,0:00:48.02,0:00:54.58,Default,,0000,0000,0000,,Aquí, los límites de la secuencia diana se indican mediante el resaltado de violeta y verde.
Dialogue: 0,0:00:54.58,0:01:00.01,Default,,0000,0000,0000,,Si se mueve desde estas secuencias en el cinco prima hacia el tres prima, la dirección...
Dialogue: 0,0:01:00.01,0:01:06.06,Default,,0000,0000,0000,,de la síntesis de ADN normal, el resaltado violeta se extiende a lo largo de una cadena y el resaltado verde...
Dialogue: 0,0:01:06.06,0:01:09.04,Default,,0000,0000,0000,,se extiende a lo largo de la cadena complementaria.
Dialogue: 0,0:01:09.04,0:01:15.73,Default,,0000,0000,0000,,Es difícil mostrar cómo funciona la PCR utilizando esta representación de doble hélice del ADN,
Dialogue: 0,0:01:15.73,0:01:22.01,Default,,0000,0000,0000,,así que se convertirá al diagrama en una imagen del ADN más fácil de entender.
Dialogue: 0,0:01:22.01,0:01:27.55,Default,,0000,0000,0000,,Además de la muestra clínica, la PCR requiere tres ingredientes.
Dialogue: 0,0:01:27.55,0:01:33.89,Default,,0000,0000,0000,,En primer lugar, debe haber un suministro masivo de cada uno de los cuatro nucleótidos.
Dialogue: 0,0:01:33.89,0:01:40.89,Default,,0000,0000,0000,,En segundo lugar, el usuario debe añadir una gran cantidad de pequeños iniciadores sintéticos diseñados...
Dialogue: 0,0:01:40.89,0:01:47.01,Default,,0000,0000,0000,,para hibridizar la secuencia de unión de cualquiera de los extremos del ADN diana.
Dialogue: 0,0:01:47.01,0:01:53.44,Default,,0000,0000,0000,,Los iniciadores son los ingredientes que conforman la reacción específica dado que sólo el ADN...
Dialogue: 0,0:01:53.44,0:01:58.93,Default,,0000,0000,0000,,que se encuentra entre estos dos cebadores será sintetizado en la reacción de PCR.
Dialogue: 0,0:01:58.93,0:02:04.07,Default,,0000,0000,0000,,En tercer lugar, la reacción requiere de la enzima ADN polimerasa
Dialogue: 0,0:02:04.07,0:02:10.54,Default,,0000,0000,0000,,Esta polimerasa para la PCR es en realidad de una bacteria que normalmente crece en el mar alrededor de...
Dialogue: 0,0:02:10.54,0:02:14.35,Default,,0000,0000,0000,,respiraderos geotérmicos calientes en el fondo del océano.
Dialogue: 0,0:02:14.35,0:02:20.05,Default,,0000,0000,0000,,La bacteria se llama Thermus aquaticus y la polimerasa se llama Taq polimerasa,
Dialogue: 0,0:02:20.05,0:02:21.08,Default,,0000,0000,0000,,para abreviar.
Dialogue: 0,0:02:21.08,0:02:29.02,Default,,0000,0000,0000,,Esta enzima exótica se utiliza porque no es inactivada por las altas temperaturas generadas...
Dialogue: 0,0:02:29.02,0:02:31.05,Default,,0000,0000,0000,,en la reacción.
Dialogue: 0,0:02:31.05,0:02:38.09,Default,,0000,0000,0000,,Todos estos elementos se mezclan en proporciones adecuadas y se colocan en un instrumento llamado...
Dialogue: 0,0:02:38.09,0:02:40.06,Default,,0000,0000,0000,,termociclador.
Dialogue: 0,0:02:40.06,0:02:47.38,Default,,0000,0000,0000,,Este instrumento puede ser programado para determinar la temperatura de la mezcla a través de una serie...
Dialogue: 0,0:02:47.38,0:02:49.94,Default,,0000,0000,0000,,de ciclos repetitivos.
Dialogue: 0,0:02:49.94,0:02:57.05,Default,,0000,0000,0000,,La temperatura de la reacción en esta demostración se presenta en el panel inferior derecho.
Dialogue: 0,0:02:57.05,0:03:04.11,Default,,0000,0000,0000,,En la primer ronda de PCR la temperatura se eleva hasta un punto en que el ADN se funde...
Dialogue: 0,0:03:04.11,0:03:08.09,Default,,0000,0000,0000,,y las cadenas complementarias se separan una de la otra.
Dialogue: 0,0:03:08.09,0:03:14.71,Default,,0000,0000,0000,,Luego, la temperatura se baja a un nivel en el que las cadenas complementarias pueden volver a asociarse.
Dialogue: 0,0:03:14.71,0:03:24.19,Default,,0000,0000,0000,,Sin embargo, dado que los cebadores están presentes en la mezcla en grandes cantidades, es más probable que...
Dialogue: 0,0:03:24.19,0:03:28.04,Default,,0000,0000,0000,,se unan a los sitios complementarios cuando las cadenas se re-asocian.
Dialogue: 0,0:03:28.04,0:03:37.25,Default,,0000,0000,0000,,A medida que la temperatura se reduce aún más, la polimerasa encuentra los extremos libres de los...
Dialogue: 0,0:03:37.25,0:03:44.01,Default,,0000,0000,0000,,iniciadores y la enzima comienza a añadir nucleótidos al extremo del cebador utilizando la cadena...
Dialogue: 0,0:03:44.01,0:03:45.36,Default,,0000,0000,0000,,complementaria como patrón.
Dialogue: 0,0:03:45.36,0:03:52.04,Default,,0000,0000,0000,,El mismo proceso se produce cuando el ADN se replica en la división celular normal.
Dialogue: 0,0:03:52.04,0:04:00.03,Default,,0000,0000,0000,,Al final de la primera ronda de la PCR habrá dos copias de la secuencia diana para cada...
Dialogue: 0,0:04:00.03,0:04:04.50,Default,,0000,0000,0000,,uno de los que estaba presente en la muestra clínica.
Dialogue: 0,0:04:04.50,0:04:12.02,Default,,0000,0000,0000,,Se puede hacer un seguimiento de la amplificación en el panel que aparecerá en la parte inferior izquierda.
Dialogue: 0,0:04:12.02,0:04:17.07,Default,,0000,0000,0000,,El mismo proceso se repite en la segunda ronda de la PCR.
Dialogue: 0,0:04:17.07,0:04:25.01,Default,,0000,0000,0000,,El termociclador calienta la muestra para separar las cadenas complementarias de ADN,
Dialogue: 0,0:04:25.01,0:04:28.09,Default,,0000,0000,0000,,incluyendo aquellas que acaban de ser sintetizadas.
Dialogue: 0,0:04:28.09,0:04:35.02,Default,,0000,0000,0000,,La temperatura se baja para permitir que los iniciadores se unan a sus sitios específicos y para que la...
Dialogue: 0,0:04:35.02,0:04:41.00,Default,,0000,0000,0000,,Taq polimerasa sintetice las cadenas complementarias cuando la temperatura se baje...
Dialogue: 0,0:04:41.00,0:04:47.07,Default,,0000,0000,0000,,de nuevo.
Dialogue: 0,0:04:47.07,0:04:54.04,Default,,0000,0000,0000,,En la tercera ronda se produce el mismo ciclo con la temperatura de la reacción, se sube para la fusión de...
Dialogue: 0,0:04:54.04,0:05:00.10,Default,,0000,0000,0000,,las cadenas, y luego se baja para la unión de los iniciadores y una nueva síntesis de la cadena ocurre cuando...
Dialogue: 0,0:05:00.10,0:05:06.09,Default,,0000,0000,0000,,las cadenas están preparadas para que la ADN polimerasa inicie la adición de nucleótidos.
Dialogue: 0,0:05:06.09,0:05:14.09,Default,,0000,0000,0000,,Al final de la tercera ronda habrá ocho copias de doble cadena de la secuencia diana,
Dialogue: 0,0:05:14.09,0:05:18.08,Default,,0000,0000,0000,,donde originalmente había solo una.
Dialogue: 0,0:05:18.08,0:05:25.10,Default,,0000,0000,0000,,El marco de la ampliación de la parte inferior izquierda mostrará ahora lo que ocurre con los ciclos sucesivos
Dialogue: 0,0:05:25.10,0:05:28.00,Default,,0000,0000,0000,,de la PCR.
Dialogue: 0,0:05:28.00,0:05:34.02,Default,,0000,0000,0000,,Con cada ciclo, el número de copias de la secuencia diana se duplica, por lo que habrá dieciséis...
Dialogue: 0,0:05:34.02,0:05:42.01,Default,,0000,0000,0000,,copias después de cuatro ciclos, treinta y dos copias después de cinco ciclos, y sesenta y cuatro copias después...
Dialogue: 0,0:05:42.01,0:05:44.00,Default,,0000,0000,0000,,de seis ciclos.
Dialogue: 0,0:05:44.00,0:05:50.06,Default,,0000,0000,0000,,En el momento que el termociclador ha completado cuarenta ciclos los iniciadores y los nucleótidos...
Dialogue: 0,0:05:50.06,0:05:57.06,Default,,0000,0000,0000,,probablemente se agotarán, pero en teoría quedarán diez a la doce (10e12) copias
Dialogue: 0,0:05:57.06,0:06:03.06,Default,,0000,0000,0000,,La secuencia diana se habrá amplificado un billón de veces.
Dialogue: 0,0:06:03.06,0:06:11.06,Default,,0000,0000,0000,,Este nivel de amplificación produce suficiente cantidad de ADN específico como para poder visualizarlo...
Dialogue: 0,0:06:11.06,0:06:14.08,Default,,0000,0000,0000,,en un gel por electroforesis.
Dialogue: 0,0:06:14.08,0:06:22.09,Default,,0000,0000,0000,,La banda grande de ADN en la parte superior del gel representa el complejo de ADN que estaba presente...
Dialogue: 0,0:06:22.09,0:06:24.07,Default,,0000,0000,0000,,en la muestra clínica.
Dialogue: 0,0:06:24.07,0:06:34.04,Default,,0000,0000,0000,,Sin embargo, una nueva banda más pequeña aparece en las muestras tomadas de los últimos ciclos de la PCR.
Dialogue: 0,0:06:34.04,0:06:43.06,Default,,0000,0000,0000,,Para los propósitos de diagnóstico de laboratorio el ADN amplificado puede ser detectado y cuantificado por métodos...
Dialogue: 0,0:06:43.06,0:06:49.01,Default,,0000,0000,0000,,más eficientes y más simples que el gel por electrophoresis.
Dialogue: 0,0:06:49.01,0:06:52.84,Default,,0000,0000,0000,,Uno de estos métodos se describe en un programa adjunto.