(Russian Translation by Ksenia Skrypnik, Russian Cancer Research Center) Иммуноферментный анализ или ИФА является одним из наиболее распространенных серологических исследований.
Цель этой анимации - объяснить принцип работы этого метода.
ИФА обычно проводят в микротитровальных планшетах со множеством лунок,
в которых легко готовить необходимые разведения образцов сыворотки.
Для того, чтобы разобраться, как работает иммуноферментный анализ, давайте посмотрим,
что происходит в одной из лунок.
На поверхности лунок находится антиген, необходимый для проведения анализа.
В коммерческих наборах антиген наносится на поверхность лунок производителем.
Сперва следует внести в лунки различные разведения сыворотки, полученной от пациента.
Если в тестируемом образце присутствуют антитела против антигена, то они образуют комплекс антиген-антитело,
локализующийся на дне лунок.
С антигеном на поверхности лунок могут связываться только специфические к этому антигену антитела.
Для удаления несвязавшихся антител лунки промывают.
Далее необходимо добавить раствор животных антител против человеческих антител.
Эти вторые антитела ковалентно связаны с ферментом.
Лунки вновь промывают для удаления несвязавшихся вторых антител.
В конце в лунки добавляют субстратный раствор, который может менять цвет.
Взаимодействие субстрата с ферментом, ковалентно связанным со вторыми антителами, приводит к видимому окрашиванию
раствора.
Развитие окраски в лунках может быть заметно невооруженным глазом
или с помощью спектрофотометра для титровальных планшетов.
Чем сильнее разбавлена сыворотка, тем менее интенсивно проходит реакция,
так как концентрация связанных антител в лунках снижается.
Титром называют самое сильное разведение, при котором различимо развитие окраски.