0:00:00.021,0:00:06.079
(Russian Translation by Ksenia Skrypnik, Russian Cancer Research Center)[br]Иммуноферментный анализ или ИФА является одним из наиболее распространенных серологических исследований.

0:00:06.079,0:00:13.092
Цель этой анимации - объяснить принцип работы этого метода.

0:00:13.092,0:00:19.749
ИФА обычно проводят в микротитровальных планшетах со множеством лунок,

0:00:19.749,0:00:21.098
в которых легко готовить необходимые разведения образцов сыворотки.

0:00:21.098,0:00:26.569
Для того, чтобы разобраться, как работает иммуноферментный анализ, давайте посмотрим,

0:00:26.569,0:00:29.149
что происходит в одной из лунок.

0:00:29.149,0:00:33.071
На поверхности лунок находится антиген, необходимый для проведения анализа.

0:00:33.071,0:00:38.179
В коммерческих наборах антиген наносится на поверхность лунок производителем.

0:00:38.179,0:00:43.000
Сперва следует внести в лунки различные разведения сыворотки, полученной от пациента.

0:00:43.000,0:00:47.429
Если в тестируемом образце присутствуют антитела против антигена, то они образуют комплекс антиген-антитело,

0:00:47.429,0:00:49.014
локализующийся на дне лунок.

0:00:49.014,0:00:55.005
С антигеном на поверхности лунок могут связываться только специфические к этому антигену антитела.

0:00:55.005,0:00:59.829
Для удаления несвязавшихся антител лунки промывают.

0:00:59.829,0:01:05.004
Далее необходимо добавить раствор животных антител против человеческих антител.

0:01:05.004,0:01:10.014
Эти вторые антитела ковалентно связаны с ферментом.

0:01:10.014,0:01:16.979
Лунки вновь промывают для удаления несвязавшихся вторых антител.

0:01:16.979,0:01:21.028
В конце в лунки добавляют субстратный раствор, который может менять цвет.

0:01:21.028,0:01:26.229
Взаимодействие субстрата с ферментом, ковалентно связанным со вторыми антителами, приводит к видимому окрашиванию

0:01:26.229,0:01:27.659
раствора.

0:01:27.659,0:01:32.096
Развитие окраски в лунках может быть заметно невооруженным глазом

0:01:32.096,0:01:37.061
или с помощью спектрофотометра для титровальных планшетов.

0:01:37.061,0:01:42.027
Чем сильнее разбавлена сыворотка, тем менее интенсивно проходит реакция,

0:01:42.027,0:01:44.078
так как концентрация связанных антител в лунках снижается.

0:01:44.078,0:01:48.078
Титром называют самое сильное разведение, при котором различимо развитие окраски.