1 00:00:00,299 --> 00:00:05,054 (Portuguese translation by Marina S. Rodrigues. Revisão: Pedro Polidoro). Muitos testes rápidos de diagnóstico detectam antígenos específicos em amostras biológicas 2 00:00:05,054 --> 00:00:08,001 usando um imunoensaio enzimático. 3 00:00:08,001 --> 00:00:14,018 O objetivo desta animação é explicar como funciona um protótipo deste teste. 4 00:00:14,018 --> 00:00:19,008 O imunoensaio enzimático pode ser feito em uma placa de microtitulação com múltiplos poços ou em qualquer outra superfície sólida 5 00:00:19,008 --> 00:00:20,055 de aderência. 6 00:00:20,055 --> 00:00:25,065 Eu vou usar a placa de microtitulação neste exemplo. Então, vamos dar uma olhada em um dos poços 7 00:00:25,065 --> 00:00:30,399 deste teste para ver o que acontece durante a realização do ensaio. 8 00:00:30,399 --> 00:00:35,329 A placa é preparada para realizar um ensaio específico pelo revestimento dos poços com anticorpos 9 00:00:35,329 --> 00:00:37,098 que se ligam ao antígeno de interesse. 10 00:00:37,098 --> 00:00:42,219 Então os poços são preenchidos com amostra clínica, o que poderia ser uma amostra de soro, 11 00:00:42,219 --> 00:00:46,078 secreções respiratórias, líquido cefalorraquidiano, urina ou algum outro fluido corporal. 12 00:00:46,078 --> 00:00:51,179 Se o antígeno estiver presente na amostra, ele se ligará aos anticorpos fixos. 13 00:00:51,179 --> 00:00:55,449 Neste exemplo, a forma verde representa o antígeno de interesse e as outras formas 14 00:00:55,449 --> 00:00:57,071 representam outras moléculas na amostra. 15 00:00:57,071 --> 00:01:03,005 Entretanto, note que apenas o antígeno específico, ou verde, e nenhuma das moléculas irrelevantes, 16 00:01:03,005 --> 00:01:05,025 liga-se aos poços revestidos por anticorpos. 17 00:01:05,025 --> 00:01:08,027 Isso explica a especificidade do teste. 18 00:01:08,027 --> 00:01:12,086 Os poços são então lavados para remover qualquer molécula não ligada deixando o antígeno 19 00:01:12,086 --> 00:01:15,016 de interesse preso aos poços. 20 00:01:15,016 --> 00:01:20,084 Agora é adicionado um segundo anticorpo, dirigido contra outro epítopo no antígeno alvo. 21 00:01:20,084 --> 00:01:25,057 Estes anticorpos são conjugados covalentemente a uma enzima indicada pelo círculo amarelo 22 00:01:25,057 --> 00:01:28,067 na porção FC do segundo anticorpo. 23 00:01:28,067 --> 00:01:32,053 Eles se ligam ao antígeno fixo no poço fornecendo um segundo nível 24 00:01:32,053 --> 00:01:34,095 de especificidade para o ensaio. 25 00:01:34,095 --> 00:01:40,036 Os poços são lavados novamente para remover quaisquer anticorpos não ligados e na etapa final uma solução 26 00:01:40,036 --> 00:01:45,004 de substrato enzimático cromogênico é adicionada. 27 00:01:45,004 --> 00:01:49,093 A interação do substrato e da enzima capturada gera uma cor visível na 28 00:01:49,093 --> 00:01:51,083 solução. 29 00:01:51,083 --> 00:01:56,003 No nível macroscópico, o desenvolvimento de cor indica as amostras que têm 30 00:01:56,003 --> 00:01:59,059 anticorpo secundário ligado ao antígeno alvo dos poços. 31 00:01:59,059 --> 00:02:03,074 Assim, os poços que mudam de cor são os que contêm o antígeno de interesse, 32 00:02:03,074 --> 00:02:06,000 em outras palavras, os resultados positivos.