(Portuguese translation by Marina S. Rodrigues. Revisão: Pedro Polidoro). Muitos testes rápidos de diagnóstico detectam antígenos específicos em amostras biológicas
usando um imunoensaio enzimático.
O objetivo desta animação é explicar como funciona um protótipo deste teste.
O imunoensaio enzimático pode ser feito em uma placa de microtitulação com múltiplos poços ou em qualquer outra superfície sólida
de aderência.
Eu vou usar a placa de microtitulação neste exemplo. Então, vamos dar uma olhada em um dos poços
deste teste para ver o que acontece durante a realização do ensaio.
A placa é preparada para realizar um ensaio específico pelo revestimento dos poços com anticorpos
que se ligam ao antígeno de interesse.
Então os poços são preenchidos com amostra clínica, o que poderia ser uma amostra de soro,
secreções respiratórias, líquido cefalorraquidiano, urina ou algum outro fluido corporal.
Se o antígeno estiver presente na amostra, ele se ligará aos anticorpos fixos.
Neste exemplo, a forma verde representa o antígeno de interesse e as outras formas
representam outras moléculas na amostra.
Entretanto, note que apenas o antígeno específico, ou verde, e nenhuma das moléculas irrelevantes,
liga-se aos poços revestidos por anticorpos.
Isso explica a especificidade do teste.
Os poços são então lavados para remover qualquer molécula não ligada deixando o antígeno
de interesse preso aos poços.
Agora é adicionado um segundo anticorpo, dirigido contra outro epítopo no antígeno alvo.
Estes anticorpos são conjugados covalentemente a uma enzima indicada pelo círculo amarelo
na porção FC do segundo anticorpo.
Eles se ligam ao antígeno fixo no poço fornecendo um segundo nível
de especificidade para o ensaio.
Os poços são lavados novamente para remover quaisquer anticorpos não ligados e na etapa final uma solução
de substrato enzimático cromogênico é adicionada.
A interação do substrato e da enzima capturada gera uma cor visível na
solução.
No nível macroscópico, o desenvolvimento de cor indica as amostras que têm
anticorpo secundário ligado ao antígeno alvo dos poços.
Assim, os poços que mudam de cor são os que contêm o antígeno de interesse,
em outras palavras, os resultados positivos.