Microscopic Staining for Blood Parasites

This six minute video demonstrates staining methods for microscopic diagnosis of malaria, including Field's (rapid) staining and Giemsa staining. This resource was developed by Charles Adjei Osei of the Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Kwame Nkrumah University of Science and Technology and Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(French translation by Samuel Scherber.) Utiliser un échantillon de sang veineux qui est stocké dans une tube sous-vide et bien mélangée.

Prenez-en une goutte et deposez-la sur une lame de microscope.

On pouvait également utiliser du sang prélevé par une piqûre au doigt, normalement du troisième ou du quatrième doigt.

En utilisant une autre lame de microscope, étaler la goutte de sang pour qu'elle prenne une forme mince.

Sécher la lame à l'air sur un égouttoir.

Préparer un frottis épais en déposant du sang d'une tube sous-vide sur une autre lame;

vous pouvez également utiliser le sang dérivé d'une piqûre au doigt.

En utilisant une autre lame de microscope, étaler le sang sur la lame originale.

Laissez sécher à l'air sur l'égouttoir ou dans un incubateur.

La technique de coloration rapide de Field pour le paludisme:

Tremper le frottis épais dans la solution A pendant cinq secondes.

Cela rend les globules rouges déhémoglobinisés.

Rincer à l'eau du robinet ou à l'eau tamponnée.

Trempez-la alors dans la solution B tache pendant cinq secondes.

Ensuite, rincer à l'eau du robinet ou sous de l'eau tamponnée.

Sécher à l'air sur l'égouttoir.

Fixer le frottis mince au méthanol pendant deux secondes.

Laissez sécher à l'air et ensuite colorer-la dans la solution B pendant six secondes.

Ensuite, rincer à l'eau du robinet ou de l'eau tamponnée.

Colorer-la dans la solution A pendant six secondes.

Ensuite, rincer à l'eau du robinet pour débarasser de colorant d'excès. Cette coloration

s'appelle 'coloration rivière' et elle serve à préserver les globules rouges.

La coloration au Giemsa:

Colorer le frottis épais dans une dilution au dixième de Giemsa pendant cinq à quinze minutes.

Rincer la lame à l'eau du robinet ou sous de l'eau tamponnée pour éliminer la coloration de l'excès .

Par contre, le frottis mince est d'abord fixé au méthanol pendant deux secondes, et ensuite mis dans la solution de Giemsa

de dilution au dixième pendant cinq à quinze minutes.

Rincer à l'eau du robinet ou de l'eau tamponnée et sécher à l'air sur

un égouttoir.

Examiner les frottis minces au microscope à cent fois de magnification (100x) en utilisant l'immersion dans l'huile.

Il est préférable d'utiliser les frottis épais pour visualiser les parasites et les globules blancs.

Les parasites ressemblent aux anneaux ou aux points, qui apparaissent en paires.

Par contre, on utilise les frottis minces, pour visualiser les parasites qui se trouvent à l'intérieur du globule rouge, ce qui peut être

utilisé comme un moyen d'identifier les espèces de parasites.