Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

This short animation demonstrates enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to measure specific antibodies. This resource was developed by Cary Engleberg of the University of Michigan. It is part of a larger learning module about laboratory methods for clinical microbiology. The full learning module, editable animation, and video transcript are available at http://open.umich.edu/education/med/oernetwork/med/microbiology/clinical-microbio-lab/2009. Copyright 2009-2010, Cary Engleberg. This is licensed under a Creative Commons Attribution Noncommercial 3.0 License http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/.

(Russian Translation by Ksenia Skrypnik, Russian Cancer Research Center)
Иммуноферментный анализ или ИФА является одним из наиболее распространенных серологических исследований.

Цель этой анимации - объяснить принцип работы этого метода.

ИФА обычно проводят в микротитровальных планшетах со множеством лунок,

в которых легко готовить необходимые разведения образцов сыворотки.

Для того, чтобы разобраться, как работает иммуноферментный анализ, давайте посмотрим,

что происходит в одной из лунок.

На поверхности лунок находится антиген, необходимый для проведения анализа.

В коммерческих наборах антиген наносится на поверхность лунок производителем.

Сперва следует внести в лунки различные разведения сыворотки, полученной от пациента.

Если в тестируемом образце присутствуют антитела против антигена, то они образуют комплекс антиген-антитело,

локализующийся на дне лунок.

С антигеном на поверхности лунок могут связываться только специфические к этому антигену антитела.

Для удаления несвязавшихся антител лунки промывают.

Далее необходимо добавить раствор животных антител против человеческих антител.

Эти вторые антитела ковалентно связаны с ферментом.

Лунки вновь промывают для удаления несвязавшихся вторых антител.

В конце в лунки добавляют субстратный раствор, который может менять цвет.

Взаимодействие субстрата с ферментом, ковалентно связанным со вторыми антителами, приводит к видимому окрашиванию

раствора.

Развитие окраски в лунках может быть заметно невооруженным глазом

или с помощью спектрофотометра для титровальных планшетов.

Чем сильнее разбавлена сыворотка, тем менее интенсивно проходит реакция,

так как концентрация связанных антител в лунках снижается.

Титром называют самое сильное разведение, при котором различимо развитие окраски.